端粒酶的前景.docVIP

抗癌新靶点端粒酶在绝大多数恶性肿瘤中特异性表达，这使得人们对肿瘤的抗端粒酶疗法产生了特别的关注。设想以端粒、端粒酶为靶点，通过抑制癌细胞端粒酶活性或直接抑制端粒延长、稳定，而使细胞无法连续增殖，继而进入衰老途径，直至死亡。同时端粒、端粒酶在肿瘤细胞与正常体组织之间的差别又可以减少端粒、端粒酶抑制剂对机体的毒副作用。现对端粒、端粒酶抑制剂研究进展予以分类介绍。 　　1 控制端粒延长靶点的物质 　　目前对端粒的研究表明，端粒是真核生物染色体末端的特殊结构，包含若干的DNA双链重复序列，其末端为含多个G的单链DNA．不同物种端粒的重复序列和长度是不一样的，但每种生物体有其特定的序列和平均长度［如人的端粒为（TTAGGG）n，大约在15kb左右］。此外，端粒DNA上还结合有蛋白质，有两种结合形式：一种是结合于单链DNA；另一种则与端粒双链进行结合。前者在端粒末端提供帽状结构以稳定端粒；后者可能直接参与端粒长度平衡的维持，是端粒延伸的负调节因子［1］。目前所分离到的人端粒结合蛋白hTRF是一种双链结合蛋白，它参与维持端粒长度的稳定［2］。改变端粒结构和功能的抑制剂介绍如下。 　　1．1　改变端粒结构导致的端粒酶活性失常　端粒是由大量串联的重复序列组成的，其中一条链富含G，另一条富含C。端粒合成时先由端粒酶将端粒重复序列加到富G链上去，再由DNA聚合酶合成富C链。不同生物的端粒G链一般都采用紧实结构。而在所有的结构中，G-四联体是理论上最稳定的结构，它除了可在两条DNA分子间形成外，还可以在含四段重复端粒序列单链DNA中形成。Zahleretal［3］考察了端粒DNA的不同折叠方式作为引物时对四膜虫端粒酶的影响。他们发现端粒G－四联体结构启动端粒酶延伸端粒的效率最差，不能作为端粒酶的引物，另外，他们的进一步研究发现，端粒酶所需的引物可能不应有任何折叠。折叠的端粒DNA结构由于无法作为引物与端粒酶RNA组分碱基配对、结合，或者改变了端粒引物从端粒酶解离的速度而影响端粒的延伸。目前，所有已知生物的端粒都是在富G的那条链上由端粒酶进行端粒合成，因此，能促使或稳定端粒形成G-四联体结构的物质可能对癌症有潜在治疗意义。在Zahler et al［3］的报道中指出体外生理浓度（20mmol／L）下的K＋、Na＋离子可以形成稳定G-四联体结构，以前者的效果更明显．Sunetal［4］应用经典的引物端粒酶延伸技术为手段进行实验，发现小分子化合物2，6―二酰胺蒽醌能抑制端粒酶活性，其IC50为23μmol／L，在约100μmol／L时几乎可以完全抑制端粒酶活性他们用UV（ultraviolet spectroscopy）和1H-NMR（1H-nuclear magnetic resonance spectroscopy）检测滴定结果，证明了该种物质对端粒酶的抑制是与端粒G-四联体结构直接相关的。与此有关的细胞内抑制端粒酶作用正在研究之中。Fedoroff et al［5］也采用NMR的方法进行研究，报道了3，4，9，10-perylenetetracarboxylic diimide－based化合物结合G-四联体结构从而抑制端粒酶活性。另外，Burger et al［6］最新的研究表明，早已被应用于临床的抗癌药物顺铂也是一种序列专一性的G-Pt-G交联剂，研究发现顺铂能抑制人睾丸肿瘤细胞中的端粒酶活性，这可能正是顺铂能有效治疗多种肿瘤的原因之一。类似化合物还有炭花青Carbocynamine。 　　1．2　端粒结合蛋白与端粒活性抑制　关于端粒的延伸、加工机制有多种不同的假设模型，无论哪一种都认为，端粒结合蛋白（telomere binding proteins，TBPs）及其他一些附属因子在端粒长度的调节中起着不可或缺的作用．它们或者通过影响端粒酶活性，或者通过直接对端粒进行加工、剪切来共同完成对端粒长度的调节［1］。在对四膜虫单链TBPs的研究过程中发现，该α／β异二聚体蛋白质中α，β蛋白在体内都是磷酸化的；体外研究也表明，β亚基的磷酸化是随细胞周期而调节的。这一磷酸化机制很可能在端粒酶延伸端粒的过程中起作用［1］。另外，酵母的Rapl是目前研究最深入的一种端粒双链TBP，它在端粒的长度调节机制中的作用十分复杂，是通过与其他一些蛋白的相互作用来完成的［1］。因此，设想以TBPs为靶点，通过抑制或调节TBPs及相关因子的活性来抑制端粒酶，缩短端粒，从而使肿瘤细胞死亡。但目前尚未有关于人端粒结合蛋白特异性抑制物的报道。 　　2　抑制端粒酶结构和功能靶点的物质 　　端粒酶是一种核糖核酸蛋白质复合物。其RNA组分为端粒合成提供模板。现认为，人的端粒酶RNA分为两个区与引物作用：一个是模板区，含有与引物互补的11个核苷酸5＇-（CUAACCCUAAC）-3＇；另