贝类精子质量检测与评价方法的研究Ⅲ：FDA-PI双荧光复染法检测马氏珠母贝精子的存活率.pdfVIP

第32卷 第 1期 广东海洋大学学报 VOl-32NO．1 20l2年 2月 JournalofGuangdongOceanUniversity Feb．2O12 贝类精子质量检测与评价方法的研究Ⅲ FDA．PI双荧光复染法检 lJ马氏珠母贝精子的存活率 豆 伟，王梅芳，郑 娇，余祥勇 (广东海洋大学水产学院，广东 湛江 524025) 摘 要：将马氏珠母贝新鲜精液和精子水浴致死精液配制含有不同精子死亡率(0％、20％、40％、60％、80％) 的 5浓度梯度检测样品，并作为理论精子死亡率 ，采用二乙酰荧光素 (Fluoresceindiacetate，FDA)．碘化丙啶 (Propidiumiodide，PI)双荧光复染法检测精子存活率和质膜完整性。结果表明，FDA和PI能有效区分活精子和 死精子，活精子发出绿色荧光 ，死精子发出红色荧光。各样品实测精子死亡率和理论死亡率之间呈极显著正相 关，相关系数 r=0．99(p0．01)。FDA．PI双荧光复染法检测马氏珠母贝精子存活率，灵敏度高，重复性好 ，准 确有效。 关键词：马氏珠母贝；精子；活精率；二乙酰荧光素 ；碘化丙锭 中图分类号：$968．31+6．1；Q954．43 文献标志码：A 文章编号：1673—9159(2012)01．0059．05 SpermsViabilityRateandMembraneIntegriytof ctadamartensiiwithaCombination0fFDA andPI DOU Wei，WANGM ei—fang，ZHENG—Jiao，YU Xiang—yong (FisheriesCollege，GuangdongOceanUniversity，Zhanj 馏 524025，China) Abstract：The sperm viability rate and spermsmembrane integrity were studied by combining Fluoresceindiacetate(FDA)withPropidium iodide(PI)underfluorescencemicroscope．Thesperms werestainedwithFDA nadPI．whichshowedcleardifferencebetweenthedeadandlivesperms：the livespermsweregreen nad thedeadoneswereredunderthe fluorescentmicroscopy．Then．these spemrswerekilledat60℃ (waterbath)weremixedwithfleshonesSOastoobtainsixrations(fordead spemrs)concentrations(0％，20％，40％，60％，80％)．Acorrelationdidexistbetweentheoreticalnad practicalmortaliyt ofsperms(尸0．01)．．Inconclusion，thedualassociationofFDA—PIstaining possesseshighsensitiviyt,goodrepeatabiliytandaccuracy． Keywords：Pinctadamartensii；spemr ；viabiliyt；Fluoresceindiacetate；Propidium iodide 马氏珠母贝 (Pinctadamartensii)，隶属于软体 主要集中在精子发生、超微结构2【1和精子超低温冷 动物门 (Mollusca)，瓣鳃~(Lamellibrnachia)，珍 冻[3,41等方面，而对精子质量评价的研究甚少。 珠贝 目(Pterioida)，珠母贝科