代谢工程改造酿酒酵母生产单萜的关键问题解析.pdf

摘 要 摘 要 本文以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ）CEN.PK2-1C 为研究对象，异源表达 了源于植物的单环单萜柠檬烯合成酶（Limonene synthase ）及无环单萜香叶醇合成酶 （Geraniol synthase ），并对单萜合成机理进行了推论。通过改造酿酒酵母甲羟戊酸 （Mevalonate, MVA ）途径，单萜香叶醇的产量从0.68 mg/L 提高到了 44.13 mg/L 。研究 发现，宿主对单萜的耐受程度较低成为限制单萜产量进一步提高的瓶颈。本文研究了酿 酒酵母耐受单萜的机理，为构建一株高单萜耐受性的酵母菌株提供研究依据。主要研究 成果如下： 1) 与单环单萜不同，无环单萜香叶醇合成酶可以直接在酿酒酵母内表达并生成 0.47 mg/L 香叶醇，密码子优化后的香叶醇合成酶具有更高的香叶醇合成效率。在酿酒酵 母内表达单环单萜柠檬烯合成酶不能生产柠檬烯，共表达橙花基焦磷酸（Neryl diphosphate, NPP ）合成酶与柠檬烯合成酶后实现单环单萜柠檬烯合成酶在酿酒酵母