以葡萄糖为底物合成γ-氨基丁酸重组钝齿棒杆菌的构建及其发酵研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 γ-氨基丁酸（GABA ）天然存在于生物体中，是动物神经系统的抑制性神经递质， 具有重要生理功能。GABA 的生产主要通过谷氨酸脱羧酶（GAD ）催化谷氨酸脱羧形成， 这个过程需要添加外源谷氨酸或谷氨酸钠盐作为前体物。为了获得一株能够利用廉价的 葡萄糖合成 GABA 的菌株，本研究通过对谷氨酸生产菌株进行改造，实现了以葡萄糖 为底物合成 GABA 。 本研究首先构建了钝齿棒杆菌 SYPA 5-5 精氨酸合成途径关键酶 N- 乙酰谷氨酸激酶 （NAGK ）编码基因 argB 内部缺失型菌株 C. crenatum E01 ，该菌株不再积累 L-Arg ，发 酵后能够积累约 34 g/L 的L-Glu ；其次，从本研究室经多次诱变筛选获得的高表达 GAD 的植物乳杆菌 GB 01-21 中克隆出 GAD 编码基因 lpgad，利用大肠杆菌与钝齿棒杆菌的 穿梭表达载体 pJC-tac 构建重组钝齿棒杆菌 E01/pGAD ，成功实现 GAD 在谷氨酸合成菌 株 C. crenatum E01 中的游离表达。该重组菌以葡萄糖为底物摇瓶发酵 96 h，发