提高根癌农杆菌介导的香石竹遗传转化效率的研究-林业科学研究.pdfVIP

( ) 林 业 科 学 研 究　2003 ,16 2 :123～128 Forest Research ( ) 　　文章编号 : 2003 提高根癌农杆菌介导的香石竹 遗传转化效率的研究 1 1 1 2 林荣呈 , 陈龙清 , 包满珠 , 孙振元 ( 1. 华中农业大学园艺林学学院 , 湖北 武汉 　430070 ; 2 . 中国林业科学研究院花卉中心 , 北京 　100091) 摘要 : 以无菌苗叶片为外植体 ,在根癌农杆菌介导下建立并优化了香石竹 5 个品种的遗传转化体系 。 μ 预培养 2 d 可明显提高转化率 ;香石竹品种间在转化上存在差异 ;培养基中添加 20 mol 的AgNO3 抑 制不定芽的分化 。转化植株在含 25 mg ·L - 1卡那霉素的生根培养基上培养 ,生根率为 721 % , GUS 检 测结果 55 %的转化植株呈蓝色 ,PCR 扩增表明阳性率为 322 % ,Southern 杂交证实外源基因已整合到 植物基因组中。 关键词 : 香石竹 ; 根癌农杆菌 ; 遗传转化 ; GUS 中图分类号 :S7223 　　　文献标识码 :A ( ) 　　香石竹 Dianthus cary op hy llus L 是世界四大切花之一 。传统育种方法在香石竹的品种演 化中发挥了巨大的作用 ,但是香石竹品种 目前存在的一些问题如抗病 、延长瓶插寿命等难以用 传统育种方法解决 。植物基因工程的应用克服了传统育种方法的不足[ 1] 。自 1983 年首次获 得转基因植株以来 ,转基因技术已在多种植物上获得了成功[2 ] 。花卉也已成为遗传转化研究 的活跃领域之一 ,在香石竹上的研究从 1989 年开始报道[3 ] ,此后 ,Lu 等[4～6 ] 都分别将报告基 [7 ] 因 GUS 、NPT Ⅱ转入香石竹体内,建立了遗传转化体系 。Savin 等 在延长香石竹花朵瓶插寿命 ( ) 方面取得了重大进展 ,他们将反义 ACC 氧化酶 ACO 基因转入香石竹 ,结果转基因植株花朵 [8 ] 的瓶插寿命比对照延长 8 d 。最近 ,余义勋等 在抗衰老基因的克隆与载体构建方面做了一些 [9 ] 研究 ,Zuker 等 还利用基因枪法进行了转化试验 。 [ 10 ] ( ( 本研 究在 前人研 究 的基 础 上 , 在 根 癌 农 杆 菌 A grobacterium tumef aciens Smith et Townsend) Conn) 介导下优化了以香石竹叶片为外植体的植株再生体系 ,从而为香石竹的遗传 改良、分析外源基因的表达情况 , 以及外源基因与内源基因的互作等研究打下基础 。 1 　材料