两种不吨敏感性人细胞干扰素基因组成的比较研究.PDF

遗 传 学报， 11(2);147-152,1984 ActaGeneticaSinica 两种不同敏感性人细胞干扰素 基因组成的比较研究 林建新 侯云德 段淑敏 （中国医学科学院病毒学研究所，北京） 本文采用Southern技术比较研究了 “和9干扰素基因在干扰素诱生性高低不同的两种人 细胞(HF和 Mer。细胞）染色体 DNA中的组成情况。结果表明，。和p干扰素基因在HF和 Mer。细胞染色体DNA中的组成和分布明显不同；Mern细胞的 “和p干扰素基因的拷贝数 与HF细胞相比至少要低1{1倍。说明HF和Mer。细胞干扰素基因表达的差异与其细胞染色 体DNA中干扰素基因的组成、分布及拷贝数的不同有直接的关系。 研究人细胞干扰素基因表达的机理，不仅在理论上可以阐明人细胞对这一类具有特 殊功能的诱生性蛋白的基因调控原理，而且在实用上还可以为提高干扰素的产量开辟新 的途径。过去，我们就千扰素诱生性不同的两种人细胞的干扰素基因的表达特点进行了 对比研究，结果发现两者的差异主要发生在转录前水平。本文进一步用4种限制性内切 酶分别消化HF和Mern细胞染色体DNA，利用Southern技术对。和夕干扰素基因在上 述两种细胞染色体DNA中的组成分布情况及其拷贝数进行了比较研究，以期探讨上述 转录前水平的差异与干扰素基因组成、分布及拷贝数的关系。 材 料 和 方 法 一（）细胞培养 Mern细胞系由卫生部北京药品及生物制品检定所提供，传代方 法见文献 [31oHF细胞由本室李玉英等建株，培养传代方法见文献 4［1o 二（）生化制剂 琼脂糖，SephadexG50,聚乙烯毗咯烷酮(40,000)，牛血清白蛋白， Ficoll(400,000)，牛胸腺DNA,Poly(A)RNA，十二烷基硫酸钠 (SDS)，DextranSulfate (500)5焦磷酸钠等均为美国Sigma公司出品。dATP,dCTP,dGTP,dTTP,DNase1, E.coliDNA多聚酶I系西德Boehringer-Mannheim公司出品。 (a-32P卜dATP或 a（- 32P)--dCTP系英国Amersham公司出品，比强度 410Ci/mmol。 蛋白酶K、核糖核酸酶 (RNase）均系匈牙利出品。 限制性内切酶：EcoRI,Sal1,BamHI,HindIII,IDNA- Hind111,酶切分子量标记均系美国P-L公司出品。菲锭澳红 E（.B.),澳酚蓝，Xyle- ncyanolFF,OrangeG由加拿大 Calgery大学生化系陈仁惠教授惠赠。基因转移膜 (Ge- nescreen)系美国 NEN 公司出品。 C~）细胞染色体DNA的提取 方法详见文献 5〔1o （四）质粒DNA的制备 p8218含0.9k6人。D干扰素cDNA;p#含0.85kb人61 本文于 1983年，月21日收到。 148 溃 传 掌 报 11卷 干扰素cDNA121。质粒的扩增及提取按文献 6【]介绍的方法进行。 五（）探针的制备 参照文献[12]介绍的方法，用 C（L-32P升dATP或 a（-32p卜dCTP 进行缺口翻译，标记p8218或解质粒DNA。一般大于10cpmfggDNA. 六（）限制性内切酶消化细胞染色体DNA 采用相同量 2（O,ug）的HF和Mer。细 胞染色体DNA，用事先经过检测过量的内切酶以保证彻底消化。酶反应缓冲液为：EcoRI: IOOmM Tris一HCI,pH7.2，5mMMgC12,2mM 2--mercaptoethanol，50mMNaCl;SalI:8mM Tris-HCI,pH7.6,6mM MgCi2,0.2mM EDTA,150mM NaCl;BamHI:20mM Tris-HCI, pH7.0,IOOmM NaCl，7mM MgC12,2mM 2-mercaptoethanol;Hind111:20mM Tris-HCI, pH7.4,7mM MgC2,6mM NaCl,, 酶反应于370C，消化3-6.5小时。 七（）琼脂糖凝胶