一种新型抗HIV-1药物筛选方法的建立.pdfVIP

·328 ·论著· 一种新型抗HIV一1药物筛选方法的建立 冯婷婷 胡华秦爱兰 孙蔚吴南屏甘建和 【摘要】 目的用细胞共培养和流式细胞仪检测建立新型抗HIV-1药物筛选方法，并判断这种 方法在筛选抗HIV-1药物中的应用前景。方法把JLTRG细胞和H9／HTLV一11IB细胞按照不同比例 共培养24，48，72和96h。在荧光显微镜下观察细胞绿色荧光强度和密度，同时用流式细胞仪测定绿 色荧光的表达，并确定培养体系中最佳细胞比例和培养时间。通过选出的最佳条件结合药物半衰期 检测恩夫韦肽(T20)和依非韦伦(EFV)的有效性及药物半数抑制量(IC50)。采用HIV-1P24抗原荧 光定量PCR法检测病毒载量，并采用Spearman秩相关性分析法判断其与药物浓度及平均荧光强度之 间的相关性。结果实验结果显示，JLTRG细胞与H9／HTLV-11IB细胞按照10：1的细胞数量比例共 培养72h为最佳培养比例和时间。以T20和EFV对共培养体系进行验证，结果显示随着q20和EFV 浓度的改变，共培养体系中JLTRG细胞感染HIV一1的程度不同，其IC50分别为10nmol／L和 5nmol／L。T20和EFV药物浓度与平均荧光强度以及病毒载量呈负相关(r=一1，一0．986和一1， 一1，P0．叭)；平均荧光强度与病毒载量呈正相关(r=0．986和1，P0．01)。结论本研究建立的 新型抗HIV一1药物筛选方法具有耗时短、操作方便等优点，可为抗HIV一1药物的筛选提供新的选择。 【关键词】 抗HIV药；药物筛选试验；流式细胞术；逆转录聚合酶链反应；半数抑制浓度 Establishmentofanew methodforanti-HIV-l Ailan， screening drugsFengTingting+，HuHua，Qin Sun First Wei，Wu ofInfectiousDiseases，theAffiliatedHospitalof Nanping，CanJianhe．+Department Soochow University，Suzhou215006，China author：Wu CorrespondingNanping，Entail：flwnp2013@163．con；CanJianhe，Email：ganjianhe@gmail． Com Toestablishandassessa new methodforanti—HIV—l 【Abstract】Objective screening drugs． Methods cellswereCO—culturedwithdifierent ofH9／HTLV．IIIBcellsfor JLTRG proportions 24，48，72 wereobservedfluorescence and96 and of fluorescent under green protein microscope， h．Intensitydensity andweretested flow ofcellsinCO—culture andtheculture using cytometry．Theoptimalproportion system timeweredetermined．Theeffectivenessof theirhalfmaximal E