三穗鸭肌肉生长抑制素基因的生物信息学分析.pdfVIP

中国畜牧兽医 2014年第41卷第4期 生物技术 ·1· 三穗鸭肌肉生长抑制素基因的生物信息学分析 易恒洁1·2，v，李辉1·2一，杨胜林1，2一，赵忠海1’2…，彭邦星1’2’3 550025； (1．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025；2．贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室，贵州贵阳 3．贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，贵州贵阳 550025) 法对该基因编码蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、二级结构、三级结构和功能结构域进行分析。结果表明，三穗鸭MSTN 1个跨膜结构，具有TGF-ft的主要结构。研究结果为MSTN基因的迸一步研究提供参考。 关键词：三穗鸭；肌肉生长抑制素基因；生物信息学 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1671-7236(2014)04—0001-06 肌肉生长抑制素(myostatin，MSTN)基因，又显子保守度显著高于内含子区。由于在家禽动物方 被称为生长／分化因子8(growth／differentiation面的研究较晚，最近研究发现鸡、鹅核苷酸序列的同 源性为94．6％，鸡、鹅的MSTN核苷酸序列转换为 factor，GDF一8)，是Mcpherron等(1997)研究转化生 growth 相应氨基酸序列的同源性高达97．9％(马现永等， 长因子一p(transformingfactor，TGF—p)超 家族时发现的一种新的生长因子，该基因属于分泌 蛋白转化生长因子B(TGF—B)超家族，是肌肉生长 的负凋控因子，调控着骨骼肌的生长和分化(罗钧秋 信息研究主要在哺乳动物，如马(关学敏等，2010)、耗 等，2007)。McPherron等(1997)分析得出，该基因 cDNA中只有1个开放阅读框(ORF)，可编码376 个氨基酸，它的结构具有TGF—13超家族的典型特征能的研究，在家禽方面的研究相对较少。 (Cheifetz，1987)：①N一端疏水的信号肽序列，可以本研究参照北京鸭MSTN基因序列设计引物， 跨越内质网膜，起分泌信号的作用；②前区有1个糖 以三穗鸭基因组DNA为模板，克隆三穗鸭MSTN基 基化位点；③紧挨着生物活性区由4个氨基酸 因CDS全序列，并将其蛋白质序列与其他物种 (RSRR)组成一个蛋白酶加工位点；④C一端包含9MSTN蛋白质序列进行比对，同时利用生物信息学方 个保守半胱氨酸的生物活性区，靠分子间的二硫键 法对其蛋白质序列、蛋白质三级结构和功能位点等进 形成二聚体。然而MSTN又与TGF—G家族其他成行预测，为揭示鸭MSTN的潜在功能奠定基础。 员的同源性很低(最高为45％)，MSTN基因包含31材料与方法 1．1 个外显子和2个内含子(Bellinge等，2005)，在不同试验动物 三穗鸭选自贵州千里山食品有限 物种间MSTN基因的长度有所不同。 公司养殖场。 研究结果表明，MSTN基因在不同物种间十分1．2主要试剂血液／细胞／组织基因组DNA提 保守(McPherron等，1997)，在哺乳动物中具有高 PCRMaster— 取试剂盒、琼脂糖(Agrose)、2×Taq 度的保守性(Hutcheson等，2009)，MSTN基因外 Buffer、Gold— Mix试剂、Tris、Na2EDTA、Loading DNA View工型核酸染色剂、无水乙醇、DL2000