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江苏农业科学2()C19年第4期 一233一 不同核成熟抑制剂对延边黄牛卵母细胞发育的影响 祖 晶，蒋 涛，杨月春，刘连鹏，方南洙，李钟淑，金一，尹熙俊 (延边大学农学院／吉林省高等学校工程研究中心，吉林龙井133400) 捅要：通过在卵母细胞成熟液中单独添加卵母细胞核成熟抑制剂——次黄嘌呤(hypoxanthjne，Hx)、异丁基甲基 抑制剂(Hx、IBMx)组卵母细胞卵丘扩散程度与对照组相比差异不显著(P0．05)，抑制剂组第一极体完整率显著高 于对照组，但抑制剂组囊胚发育率与对照组相比差异不显著。最终结果提示，虽然Hx和IBMx并未明显提高卵母细 胞发育潜力，但仍为两种行之有效的核成熟抑制剂。 关键词：延边黄牛；次黄嘌呤；异丁基甲基黄嘌呤；卵母细胞；卵丘扩散；极体 中图分类号：S823．8+11．32文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2009)04—0233—04 在进行卵母细胞体外成熟(讯口icr0maturation，IVM)及体本试验在卵母细胞成熟液中单独添加核成熟抑制剂—— 细胞重组胚体外培养过程中，大多数动物卵母细胞的成熟率 和卵裂率较高，但囊胚的发育率却并不是很高。Tao等…认 而提高卵母细胞后期发育潜力，为提高延边黄牛卵母细胞体 为这可能是卵母细胞胞质成熟不足所致。MernliUod等。2。认 为，体外抑制减数分裂进行预培养可以使卵母细胞充分储存 外自发成熟度，建立一个模拟体内卵泡生理环境的反刍动物 其受精和发育所必需的分子，增加卵母细胞核质成熟的同步 卵母细胞体外培养模型提供理论依据。 性。在体内，很多哺乳动物卵母细胞成熟都受到cAMP和嘌 1材料与方法 呤类物质的抑制。3J。在啮齿动物，cAMP能够阻滞培养卵母 细胞的自发减数分裂成熟。cAMP类似物或磷酸二酯酶1．1 试剂 胎牛血清(FBS)，购自杭州四季青工程材料有限公司；链 (phosphodiesterase，PDE)抑制剂均能阻止细胞内cAMP的降 vesicJe 霉素购自天河动物药业有限公司；青霉素购自哈尔滨生物制 解，从而抑制生发泡破裂(genllinalbreakdown，CVBD) 的发生卜J。反之，只要能引起卵母细胞内cAMP下降，就可引品二厂有限责任公司；FsH、LH购自宁波市三生药业有限公 起GVBD的发生。 司；磷酸缓冲液(PBs)购自日水制药株式会社；其余药品，均 购自Signla公司。 HX和IBMX均属于PDE抑制剂，是调控细胞内cAMP 水平的一种关键酶，在卵母细胞成熟分裂的调控过程中起重 1．1．1IVM液原液的配制本试验前6h添加抑制剂，去除 抑制剂后成熟18h，2阶段使用不同IVM液原液：(A)添加抑 要作用，它通过使cAMP的降解减少来提高cAMP浓度”o。 收稿日期：2009一02一18 制剂：‘rCMl99+LH(10斗吕／m1)+E2(1斗g／IIll)。 1．1．2抑制剂的配制Hx：准确称量54．5Ⅱ19Hx，溶于l 基金项目：国家自然科学基金(编号；振兴东北老工业荩 IIIl NaoH中，20山分装于l“离心管中，于一20℃冷冻保 地项目[发改高技(编号：2004—2057)]；延边州延边大学合作项 目[延大科合字(编号：2005一06)]。 存，待用；IBMx：准确称量11．1mgIBMx，溶于l“DMs0 作者简介：祖晶(1983一)。女，吉林吉林人，硕士研究生．研究方向中，20