磁性阳离子高分子脂质体结合野生型投递系统的构建-中国心血管杂志.pdfVIP

１２８ ·· ２０１２ ４ １７ ２ 　 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ Ａｐｒｉｌ２０１２ Ｖｏｌ １７ Ｎｏ２ 中国心血管杂志 年月第卷第期 ， ， ， 基础研究 · · ｐ５３ 磁性阳离子高分子脂质体结合野生型 投递系统的构建 郑锴　 张军　 翟静　 周巍　 梁晓飞　 田惠　 常津 　 　 　 　 ｐ５３ ＷＴｐ５３ 【摘要】 目的用合成的磁性阳离子高分子脂质体与野生型 （ ）基因质粒结合，构建 靶向纳米载体投递系统，为进一步行静脉内皮细胞转染奠定基础。方法应用大肠杆菌重组质粒扩　 增法扩增ＷＴｐ５３质粒ＤＮＡ，合成的磁性阳离子高分子脂质体为羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐／ 胆固 ＯＱＣＭＣ／ Ｃｈｏｌ Ｆｅ Ｏ ｐＨ ＷＴｐ５３ ＤＮＡ 醇（ ）包覆油溶性 的载体粒子。在不同的值及不同的 质粒 和载体 ３ ４ ＷＴｐ５３ ＤＮＡ ＯＱＣＭＣ／ Ｃｈｏｌ 粒子质量比的条件下，将 质粒 与 超微磁性载体粒子进行混合，并分别进行 ＤＮＡ结合实验和沉淀实验。观察电泳结果，并用ＳＰＳＳ １３０ 统计软件进行数据分析。在ＤＮａｓｅ 模 Ⅰ 仿体内酶的环境下，将其加入制备好的超微载体投递系统中，电泳后观察投递系统对ＤＮＡ 的保护作 用。应用透析系统模拟体内环境，观察超微投递系统载体与基因分离情况，并利用紫外分光光度计测 量超微载体投递系统累积缓释曲线。结果　 应用透射电镜观察ＯＱＣＭＣ／ Ｃｈｏｌ超微磁性载体粒子和 ＷＴｐ５３结合后的投递粒子。在ｐＨ７条件下，ＷＴｐ５３质粒ＤＮＡ和载体粒子质量比为１∶０６，ｐ５３质粒 ＤＮＡ与ＯＱＣＭＣ／ Ｃｈｏｌ超微磁性载体粒子经过直接静电作用几乎１００％结合，并证实该投递系统对 ＤＮＡ具有较好的保护作用。超微载体投递系统在７ ～１２ ｈ左右有明显的突释波峰，到第５４ 小时以 后，超微载体释放浓度变化缓慢，并可持续释放９ ｄ 以上。结论　 成功构建磁性阳离子高分子脂质体 ＷＴｐ５３ 结合 投递系统，将为进一步行细胞转染奠定可靠的基础，并为构建血管内靶向定位基因投递 新方法和新技术提供可靠理论依据。 　 壳聚糖季铵盐；　 磁性阳离子高分子脂质体；　 野生型ｐ５３ 【关键词】 Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｃａｔｉｏｎｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＷＴｐ５３ １ １ １ １ ２ ２ ２ ＺＨＥＮＧＫａｉ ＺＨＡＮＧ Ｊｕｎ ＺＨＡＩ Ｊｉｎｇ ＺＨＯＵ Ｗｅｉ ＬＩＡＮＧ Ｘｉａｏｆｅｉ ＴＩＡＮ Ｈｕｉ ＧＨＡＮＧ Ｊｉｎ １ ， ， ， ， ， ， Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｔｈｒｏｃｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ，ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００５２，Ｃｈｉｎａ；２ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍａｔｅｒ