裂殖壶菌产DHA的发酵工艺研究及高产菌株选育.pdfVIP

摘要 摘 要 二十二碳六烯酸（Docosahexenoic acid ，简称DHA ）是一种具有重要生理功能的ω-3 系列多不饱和脂肪酸，具有健脑益智、保护视力、预防心血管疾病以及提高机体免疫能 力等重要生理功能。因此，DHA 在医药、食品、饲料等行业具有广阔的应用前景，其 制备和加工方法也日益受到关注。DHA 的传统来源主要是从深海鱼油中提取，但是鱼 油成分复杂且DHA 含量较低，因而，寻找并利用海洋微生物发酵生产 DHA 已逐渐成 为研究的热点。裂殖壶菌（Schizochytrium ）是一种海洋真菌，具有生长快、不饱和脂肪 酸组成简单、DHA 含量高以及对人畜无毒害等特点，是一种极具工业化生产前景的DHA 微生物资源。本文选用Schizochytrium limacinum SR21 来发酵生产DHA ，主要研究内容 和结果如下： 1）根据油脂提取工艺的研究结果，确定了以酸热法破壁，氯仿- 甲醇为提取溶剂的 油脂提取方法，即酸热-有机溶剂法。经过优化后，以该方法获得的油脂得率为52.56%， 相对于优化前（45.74% ）提高了14.91%。本文将磷酸香草醛反应法与优化后的酸热-有 机溶剂法相结合，建立了快速测定菌株油脂的标准曲线，以此曲线对菌株总脂量的变化 进行快速分析，并据此在后续诱变选育中快速筛选油脂高产菌株。 2 ）考察了外源添加物生物素、柠檬酸、苹果酸和洛伐他汀对Schizochytrium limacinum SR21 发酵产DHA 的影响。结果表明外源添加物不仅能够提高DHA 的产量，还可以改 变细胞内脂肪酸的分布情况，提高DHA 在脂肪酸中的百分含量。经正交实验得到最优 外源添加物组合：0.3 mg/L 生物素，1 g/L 苹果酸和0.4 mg/L 洛伐他汀。在添加该外源 添加物组合发酵后，总油脂产量为28.93 g/L，占细胞干重68.88%，DHA 产量高达11.55 g/L，相对于原始菌株（6.72 g/L ）提高了71.87%，DHA 在总油脂中所占百分比由31.93% 提高到39.92% 。 3 ）以Schizochytrium limacinum SR21 为出发菌株进行DHA 高产菌株选育时，首先 确定筛选平板中碘乙酸和丙二酸的最适浓度，15℃的低温培养条件，并以菌株的油脂产 量和DHA 产量作为筛选指标。分别用常压室温等离子体（ARTP ）诱变、紫外（UV ） 诱变和ARTP-UV 复合诱变后，经过磷酸香草醛反应法初筛，GC 复筛，最终得到一株 DHA 高产突变株AU-1，并且该菌株传代5 次后仍保持较好的遗传稳定性。摇瓶发酵后， 该菌株DHA 产量高达 11.81 g/L，比原始菌株6.72 g/L 提高了75.74%，DHA 在脂肪酸 中所占比例由31.93%增加到40.47% 。经5 L 发酵罐发酵后，生物量、油脂产量和DHA 产量分别为50.71 g/L、35.65 g/L、15.43 g/L，生产强度达到142.87 mg/L/h ，与原始菌株 （46.78 g/L、32.65 g/L、13.26 g/L、110.5 mg/L/h ）相比均有一定程度的提升，其中DHA 产量提高了16.37%，效果显著。 关键词：二十二碳六烯酸（DHA ）；添加物；诱变；筛选；裂殖壶菌 I Abstract Abstract Doco