可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5基因工程菌发酵培养和诱导表达条件的优化.pdfVIP

亿亏与。生物z程2012’voI．29 — ChemistryBioengineering doi：10．3969／j．issn．1672—5425．2012．04．008 5 可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 基因工程菌发酵培养和诱导表达条件的优化 马晓娟，蔚萍。妙亮。边六交 (西北大学生命科学学院，陕西西安710069) 摘要：在实验室试管培养条件下优化了基因工程茵Ecoli 长抑制因子Kringle 5的培养基和诱导表达条件。经茵体干重测定和SD孓PAGE检测，确定最佳培养基(g·L_1)为；胰 蛋白胨10．0，酵母提取物5．0，NaCI 10．0，葡萄糖6．0，NH。Cl2．6，NaH2P045．0，Na2HP046．0；优化的诱导表达条件 为：诱导荆浓度0．01 mmo卜L～，诱导时间6h，诱导温度37℃，摇床转速220r·rain～。在优化的培养基和诱导表达 条件下，茵体干重为1．8g·L～，Kringle5表达量为360mg·L～，占总蛋白含量的20％，与基础LB培养基相比。Krin— gle5表达量提高了1．18倍。 关键词：血管生长抑制因子Kringle5；发酵培养基；诱导表达；基因工程茵；优化 464 789 中图分类号：TQ Q 文献标识码：A 文章编号：1672—5425(z012)04一0027一05 肿瘤的发生和发展依赖于新血管的不断形成，因 5的进一步放大生产和临床应用奠定基础。 Kringle 此抑制新血管形成(Angiogenesis)进而抑制肿瘤的生 1 实验 成已成为治疗肿瘤的一个重要靶点[1]。1994年， O 7Reilly等[2’33发现内源性血管生成抑制剂Angiosta—1．1菌种和质粒 tin是由纤溶酶原前4个饼环区组成；1997年，Cao 等[41发现纤溶酶原N端的第5个饼环区(Plasmino— 5基因的重组质粒 血管生长抑制因子Kringle genkringle5)同样具有抑制血管内皮细胞增殖和肿 pETl5b／K5；表达可溶型非融合血管生长抑制因子 5的基因工程菌E．coli 瘤生长的能力，而且抑制能力比Angiostatin更强。Kringle 血管生长抑制因子Kringle5是目前发现的抑制 5的分子量约为28．0kD，以三聚 K5(所表达Kringle 血管内皮细胞增殖和肿瘤生长活性最强的纤溶酶原片 体形式存在)为自行构建，保存于一70℃的15％甘油 段，在肿瘤治疗方面具有潜在的应用价值和广阔的市 中。 场前景。由于Kringle5的来源有限，因此利用基因工 1．2试剂 程技术发酵生产重组Kringle5具有重要的研究和应 蛋白胨、酵母粉，英国0XOID公司；异丙基硫代一 用价值。边六交等[53对融合型血管生长抑制因子 Kringle5的发酵条件进行了优化；2011年，妙亮等[6] Amresco公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、考马斯亮 5进行了 对可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 克隆表达、分离纯化和活性测定。