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专题 1 基因工程 章末复习 知识体系构建 专题整合 一、基因工程的基本工具 限制酶 DNA连接酶 载体 作用 切割目的基因和载体 连接DNA片段，形成重组DNA 携带目的基因进入受体细胞 作用部位 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 作用特点(条件) (1)识别特定的核苷酸序列；(2)在特定位点上切割 (1)E·coli DNA连接酶只连接黏性末端；(2)T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端 (1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；(2)有多个限制酶切割位点；(3)具有特殊的标记基因 常用类型 EcoRⅠ限制酶SmaⅠ限制酶 E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶 质粒、噬菌体、动植物病毒 训练1　下列有关基因工程技术的正确叙述是 (　　) A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、载体 B．为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体细胞 C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快 D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功表达 二、基因工程的操作程序 1．目的基因的获取 (1)目的基因：指编码蛋白质的结构基因。 (2)获取方法：从基因文库获取，原核基因也可直接分离获得；真核基因主要是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 2．基因表达载体的构建 (1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)组成：启动子＋目的基因＋标记基因＋终止子。 ①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。 ②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 ③标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。 3．将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入Ti质粒T－DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→微生物细胞壁的通透性增加→重组质粒与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 4.目的基因的检测和表达 类型 步骤 检测内容 方法 结果 分子检测 第一步 目的基因是否进入受体细胞[ DNA分子杂交(DNA和DNA之间) 是否成功显示出杂交带 第二步 目的基因是否转录出信使RNA 分子杂交技术(DNA和RNA之间) 第三步 目的基因是否翻译出蛋白质 抗原—抗体杂交方法 个体水平检测 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的活性比较，以确定功能是否相同等 训练2　正确表示基因操作“四步曲”的是 (　　) A．提取目的基因→目的基因导入受体细胞→目的基因与载体结合→目的基因的检测与鉴定 B．目的基因的检测与鉴定→提取目的基因→目的基因与载体结合→目的基因导入受体细胞 C．提取目的基因→目的基因与载体结合→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 D．目的基因与载体结合→提取目的基因→目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 三、蛋白质工程 1．蛋白质工程流程 2．蛋白质工程与基因工程的区别：蛋白质工程的本质是通过改造基因进而形成自然界不存在的蛋白质，所以被形象地称为第二代基因工程；基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。 训练3　利用蛋白质工程改造天然蛋白质，进而改变其功能，可获得毒副作用减小，专一性、药效和稳定性都增强的理想的药物。如胰岛素是治疗依赖型糖尿病的特效药物，但是天然胰岛素在人体内寿命只有几小时，重症病人每天得注射好几次药物，给病人增加了不便和痛苦。通过蛋白质工程改变胰岛素的空间结构，以延长胰岛素的半衰期，得到长效胰岛素；还可以在不改变胰岛素活性部位结构的前提下，增强其他部位结合强度，使之难以被酶所破坏，从而增强其稳定性。 (1)若要批量生产以上提到的长效胰岛素，根据所学知识，需要用到哪些生物工程(　　) A．发酵工程 B．基因工程 C．蛋白质工程 D．胚胎工程 (2)用蛋白质工程生产的胰岛素，与天然胰岛素比较，显著的优点是_____________ ________________________________________________________________________。 课后作业 1．据下图所示，有关工具酶功能的叙述错误的是