1_质粒DNA的提取和浓度检测.ppt

加入150 ? l乙酸钾溶液(溶液II)，加盖后颠倒6-7次混匀，冰上放置5min; 用台式高速离心机，10000r/min离心7min，上清移入另一干净离心管，并加1ml 100％乙醇混匀，12000r/min离心5min，弃去上清液; 沉淀用0.5ml 70％乙醇清洗一次， 12000r/min离心5min，弃去上清液，小管倒置于吸水纸上，除尽乙醇，室温自然干燥; 加入30-50?l含有20?g/ml RNase的灭菌蒸馏水或TE 缓冲液溶解提取物，室温放置15-30min，使DNA充分溶解(有时需要酚:氯仿抽提); 将分离出的质粒DNA置于-20℃保存备用。 Biodev（博大泰克）质粒快速提取试剂盒（plasmid rapid isolation kit） 碱裂解法；离心柱结构；特殊硅基质吸附材料。 使用前按说明再溶液I中加入RNase；向洗脱液中按1:3的比例加入无水乙醇。 * * 分子生物学实验 任 课 教 师: 张淑平 李英姿 助教博士生: 李颖华 黄 波 唐 颖 课程基本情况简介/质粒DNA提取 基本技术 核酸 的分离纯化(Isolation and Purification of DNA and RNA)； 电泳技术(Gel Electrophoresis)； 基因重组、亚克隆及表达（Gene Recombination, Subcloning and Expression)； PCR技术 ( Polymerase Chain Reaction)； 分子杂交及互作(Molecular Hybridization and Interaction)； DNA测序技术(DNA Sequencing)； 基因功能的研究技术(Gene Function)； 基因的染色体定位（Localization of Gene to Chromosomes） 生物芯片技术（Bio-Chips or Bioarray) …….. 以完整、常用、重要为原则，经典与先进技术相结合，同时介绍相关知识，尽量让学生在有限的学时内掌握更多的分子生物学技术以及相关的知识。 我们的分子生物学实验课程的设计从整体上可以说是一个完整的大实验，因为自始至终，各实验之间相互连贯，要求学生每一次实验既得到本次实验的结果，同时也为下一次更深入的实验做准备（提供实验材料）。 课程基本情况： 4.0 4.5 5.0 5.0 7.0 6.5 6.5 6.0 5.0 6.0 学 时 13 12 10 9 8 7 6 5 4 3 周次 综合测验、实验讨论与总结 10 核酸杂交 9 核酸转膜、探针标记 8 植物总RNA的提取与电泳 7 重组克隆的鉴定 6 大肠杆菌感受态细胞的制备、重组DNA的转化及克隆筛选 5 DNA回收纯化及重组体的构建 4 聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA 3 质粒DNA酶切鉴定及琼脂糖凝胶电泳 2 课程基本情况简介/质粒DNA提取 1 备注 实 验 名 称 次 序 实验安排与实验报告 注：实验报告分为1－2、3、4 (实验6的设计) 、4－5 、 6、7、8－9、10 (6)重组克隆的鉴定实验的几点说明 手工提取质粒方法将在“实验一”中讲到，“实验六”上课时间将提前到下午1:00； 接种培养将在“重组克隆的鉴定”实验课的前一天的晚上进行（7:30-9:00pm? 9:00-10:20?）； 助博将准备好试管LB培养基，用前别忘了加你需要的抗生素; 提供的酶包括EcoRI, XhoI, BamHI, HindIII, XbaI。自己选择正确的酶使用。 。 实验方案由学生自己设计！要提前进行。 (目的意义、材料和方法、结果及讨论) 以下几点请注意： 实验操作基本要求 认真预习实验指导； 按照操作规程使用仪器设备, 注意个人以及公共设施安全； 节约实验试剂及材料； 实验完毕后，将实验器皿清洗干净，并清理实验台面； 按时、按质、按量完成实验工作，不迟到，不早退； 实事求是、认真而及时地写出实验报告。 评分考虑 平时实验课成绩 70%； 综合技术测验 30%。 实验一 质粒DNA的提取及浓度检测 目的与要求 通过质粒的一些特性、质粒DNA的提取、测定，学习用碱变性法提取质粒DNA的方法，了解用分光光度计测定DNA含量的方法。 2