环境内分泌干扰物4-壬基苯酚对无脊椎动物家蚕的生殖毒性及分子机理研究（Study on the reproductive toxicity and molecular mechanism of environmental endocrine disrupting compounds 4- nonylphenol on invertebrate silkworm）.pdfVIP

资助项目： 国家科技支撑计划重点项目（项目编号：2007BAD72B01 ） 国家高新技术研究发展计划“863”项目（编号：2011AA100306 ） 苏州市科技支撑计划（编号：SN201131 ） 苏州市农业基础研究计划（编号：SYN201206） 环境内分泌干扰物 4-壬基苯酚对无脊椎动物家蚕的生殖 毒性及分子机理研究 中文摘要 4-壬基苯酚（4-NP ）是一种环境内分泌干扰物，对包括哺乳动物的多种动物生殖系统发育都 表现出复杂的毒性效应。迄今为止，还未见4-NP对陆生无脊椎动物生殖发育的影响报告。本研究 以无脊椎模式昆虫家蚕为实验模型，采用全龄幼虫饲料添毒方式，通过组织病理切片、生理生化 检测、基因表达谱分析、蛋白IHC 、HPLC分析、组织和细胞培养等实验技术，调查了4-NP对家 蚕的生殖毒性，并探讨了其分子作用机制。在传统的动物体生殖毒理试验基础上，研究建立了简 单方便快捷的NP类环境内分泌干扰物的陆生无脊椎动物离体毒性试验模型。获得的主要结果如 下： 1. 4-NP经口暴露对家蚕具有生殖毒性 家蚕幼虫全龄饲料添加4-NP 0.05～0.4 g kg-1 ，对家蚕蛹的雌雄性比没有影响（P 0.05 ），但 两性的生殖腺指数降低了70.0 %～48.7 % ；成虫的雌雄性比在0.4 g kg-1 时显著下降了29.2 % ，产卵 数和子代孵化率分别比对照下降了80.7 %和91.8 % ； 组织病理学检测出4-NP暴露后家蚕5龄幼虫 的精巢生殖细胞发育滞后，细胞结构出现损伤。0.2 g kg-14-NP暴露的家蚕5龄幼虫体内，HPLC检 测出有4-NP累积， 脂肪体中的累积系数高于中肠、表皮和生殖腺组织；雌蚕的累积系数高于雄 蚕。表明4-NP经口暴露对家蚕具有生殖毒性。 2. 家蚕生殖腺中氧化保护酶系统对4-NP暴露敏感 家蚕幼虫全龄饲料添加4-NP 0.05～0.4 g kg-1 ，诱导生殖腺脂质过氧化产物MDA增多，耗竭 GSH，降低SOD、CAT和GPx活性，引起细胞氧化与抗氧化失衡，导致细胞损伤；同时GSH和GST 协同作用参与了对4-NP 的解毒。成虫期和蛹期生殖腺中的抗氧化酶系统比5龄幼虫期反应更加敏 感，表明家蚕生殖细胞快速发育和成熟过程中抗氧化酶系统仍然对幼虫期的4-NP暴露具有反应； 从性别而言，4-NP暴露后，雄性生殖腺的抗氧化酶活性更易被激活，并具备更好的GSH和GST协 同作用机制，雌性家蚕抗氧化酶活性下降引起的组织细胞脂质过氧化更加严重。表明4-NP能够通 过氧化损伤途径对家蚕雌性生殖发育产生更大的毒性效应，成虫期是可用于从生理指标上来检测 4-NP暴露对家蚕生殖毒性效应的敏感时期。 3. 4-NP对雌雄家蚕生殖毒性影响具有不同的分子机理 4-NP暴露使雌性家蚕生殖发育特异Vg和Esp基因的表达发生变化，IHC显示0.1 g kg-14-NP暴 露卵巢中卵黄蛋白的生成量下降。4-NP暴露通过下调雌性家蚕内分泌系统中蜕皮激素受体基因 EcR 的表达，减少卵黄蛋白由脂肪体向卵巢的转运与发育卵对卵黄蛋白的吸收；4-NP也通过下调 JNK信号途径中Jun基因的表达水平来影响卵的发育。 家蚕幼虫全龄饲料添加 4-NP 0.05～0.4 g kg-1 ，诱导了雌特异Vg基因在雄性幼虫、蛹和成虫 期的表达和IHC显示0.05 g kg-14-NP暴露组Vg蛋白在雄性蛹期的表达，表明4-NP对雄性家蚕具有 类雌激素效应。利用Vg可以作为评估4-NP和相关酚类等环境内分泌干扰物对家蚕生殖毒性效应的 有效生物标志物。4-NP暴露显著抑制雄性家蚕中生殖细胞发育相关的SoxE和Stat基因表达，而EcR 基因的表达水平没有受影响。推测4-NP暴露对雄性家蚕生殖腺或生殖细胞发育的影响可能与JAK ／STAT信号通路有关。 4. 家蚕精巢组织和生精囊细胞体外培养毒性模型能够快速检测4-NP 的雄性生殖毒性 家蚕精巢组织直接暴露于7.0～28.0 mg L-14-NP ，组织内抗氧化防御系统的平衡受到破坏，但 对生殖发育的相关基因SoxE没有显著影响。 使用接近国内太湖流域生态环境