重组牛IFN-λ3的制备及其与IFN-αIFN-βIFN-γ抗病毒活性比较研究（Preparation of recombinant bovine IFN- lambda 3 and its antiviral activity against IFN- alpha, IFN- beta and IFN- gamma）.pdf

Classified Index ： Code ：10224 Confidential (yes/no) ：no NO.100038 Dissertation for the Doctoral Degree Generation of The Bovine IFN-λ3 and Reseach on Its Antiviral Activity Compared with The Recombinant boIFN-α, boIFN-β and boIFN-γ Candidate: Zhang Runxaing Supervisor: Wang Junwei Degree Category: Doctor of Agriculture College: College of Veterinary Medicine First level discipline: Veterinary Medicine Second level discipline: Prevent Veterinary Medicine Harbin China June 2013 目 录 中文摘要I  英文摘要 III 前 言 1 1.1 IFN-α、IFN-β和 IFN-γ概述 1  1.2 IFN-λs （III 型干扰素）研究进展 3  1.2.1 基因及蛋白结构 3  1.2.2 表达和调节 4  1.2.3 IFN-λs 的受体 5  1.2.4 信号转导 6  1.2.5 抗病毒 8  1.2.6 抗肿瘤活性 14  1.2.7 免疫调节活性 15  1.3 牛干扰素研究进展 16  1.4 利用毕赤酵母表达外源蛋白的研究 18  1.4.1 毕赤酵母及其他常用表达系统简介 18  1.4.2 毕赤酵母可溶性表达影响因素 18  1.4.3 利用毕赤酵母表达干扰素的研究 20  1.5 目的与意义 20  2 材料与方法 21  2.1 材料 21  2.1.1 质粒、宿主菌 21  2.1.2 细胞、病毒、培养基、血清 21  2.1.3 酶、抗体、生化试剂和耗材 21  2.1.4 主要仪器和设备 22  2.1.5 试剂配制 22  2.2 试验方法 23  2.2.1 牛 IFN-λ3 （boIFN-λ3 ）在毕赤酵母中的分泌表达 23  2.2.2 重组牛 IFN-α/IFN-β/IFN-γ 的表达 31  2.2.3 重组牛 IFN-λ3/IFN-α/IFN-β/IFN-γ 生物学活性初步测定 33  2.2.4 重组牛 IFN-λ3 的理化特性分析 33  2.2.5 重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ 的细胞毒性检测 34  2.2.6 重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ 比较对 Mx1 蛋白和 ISRE 活性的影响.. 34  2.2.7 重组牛 IFN-λ3 和 IFN-α/IFN-β/IFN-γ抗病毒活性比较研究 35  2.2.8 ncpBVDV 持续性细胞感染对重组牛 IFN-λ3 抗病毒活性影响 37