2014年分子生物学简答题整理(南京中医药大学).docxVIP

DNA合成的特点以原来的DNA母链为模板，四种脱氧核苷三磷酸为前体，还需要Mg2+。根据碱基互补配对原则复制产生新的子链。2.需要解链3．半保留复制4.需要引物5.复制方向5＇　　3’6.复制起始于特定的区域，但终止位置不固定7.双向复制8.半不连续9.具有高度的忠实性DNA合成的过程DNA复制过程分三个阶段；①起始：从DNA上控制复制起始的序列即起始点开始复制，形成复制叉，复制方向多为双向，也可以是单向，若以双向进行复制，两个方向的复制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能从无到有合成新链，所以DNA复制需要有含3’-OH的引物，引物由含有引物酶的引发体合成一段含3～10个核苷酸的RNA片段；②延长：DNA复制时，分别以两条亲代DNA链为模板，当复制叉沿DNA移动时，以亲代3’→5’链为模板时，子链的合成方向是5’→3’，可连续进行；以亲代5’→3’链为模板时，子链不能以3’→5’方向合成，而是先合成出许多5’→3’方向的冈崎片段，然后连接起来形成一条子链；③终止：当一个冈崎片段的3’-OH与前一个冈崎片段的5’-P接近时，复制停止，由DNA聚合酶Ⅰ切除引物，填补空隙，连接酶连接相邻的DNA片段。参与DNA合成的酶有哪些参与DNA复制的主要酶和蛋白质有DNA聚合酶、解链酶、SSB、引发酶、拓扑异构酶、连接酶和端聚酶等。参与DNA逆转录的酶有逆转录酶。原核细胞中有哪些DNA聚合酶？分别有哪些功能和作用有5种DNA聚合酶。DNA聚合酶I具有5＇→3’聚合酶活性、5＇核酸外切酶活性、3’核酸外切酶活性，可催化单链或双链DNA 的延长并自我校对；DNA聚合酶II具有聚合酶活性、3’核酸外切酶活性，可能参与DNA修复；DNA聚合酶III有5‘到3’聚合酶活性、3’核酸外切酶活性，是促进DNA链延长的主要酶。　　DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ参与DNA修复合成。PCR的基本原理？你认为分子生物学近十年有哪些进展？类似于?DNA?的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。?PCR?由变性?--?退火?--?延伸三个基本反应步骤构成：?①?模板?DNA?的变性：模板?DNA?经加热至?93?℃?左右一定时间后，使模板?DNA?双链或经?PCR?扩增形成的双链?DNA?解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；?②?模板DNA?与引物的退火?(?复性?)?：模板?DNA?经加热变性成单链后，温度降至?55?℃?左右，引物与模板?DNA?单链的互补序列配对结合；?③?引物的延伸：?DNA?模板?--?引物结合物在?TaqDNA?聚合酶的作用下，以?dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板?DNA?链互补的半保留复制链重复循环变性?--?退火?--?延伸三过程，就可获得更多的?“?半保留复制链?”?，而且这种新链又可成为下次循环的模板。重组有哪些类型DNA重组是指发生在DNA分子内或DNA分子之间核苷酸序列的交换、重排和转移现象，主要包括同源重组、位点特异性重组和转座重组。同源重组是两个DNA分子的同源序列直接进行交换。细菌的接合、转导、转化和真核细胞的同源染色体之间的交换等都属于同源重组。位点特异性重组是指在DNA特定位点上发生的重组，需要专门的蛋白质识别发生重组的特异性位点并催化重组反应。转座重组是指DNA上的核苷酸序列从一个位置转位或跳跃到另外一个位置的现象，在原核生物和真核生物的基因组内均可以发生，发生转位或跳跃的核苷酸序列被称为转座子。同源重组的条件和分子机制同源重组的条件：（1）两个DNA分子序列同源；（2）不同物种同源重组所需的最小的同源序列不同；解释同源重组的分子机制的模型：（1）断裂重接模型；（2）模板选择复制模型；（3）Holliday模型；（4）Meselon-Radding模型；同源重组分子机制简述：主要是利用DNA序列间的同源性来识别，而负责配对和重组的蛋白质因子并无碱基序列特异性。同源重组可以双向交换DNA分子，也可以单向转移DNA分子，后者又被称为基因转换。同源重组是将外源基因定位导入受体细胞染色体上的方法，因为在该座位有与导入基因同源的序列，通过单一或双交换，新基因片段可替换有缺陷的基因片段，达到修正缺陷基因的目的。举一个位点特异性的例子λ噬菌体定点插入。λ噬菌体DNA能通过重组作用整合进E.coli染色体的特异位点，成为前病毒。λ噬菌体整合反应发生时，即在attP和attB处发生交叉重组，产生两个较小的环状DNA。整合反应由整合酶催化，其步骤是彼此偶联的：四条链同时被切断、交叉和重新连接起来，其间没有发现任何稳定的中间产物。DNA双链同时被切断，然后磷酸二酯键又重新连接起来，并不需要ATP供应能量。故整合酶实际上能起拓扑异构酶的作用，可使带有att位点