2013年薄板层析法鉴定四环素纯度.ppt

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操作注意点 制板: 在研钵中研磨时应缓慢,注意不能产生气泡。 薄板移入饱和氯化铵的缸中时,不宜太干或太湿,以无明显水渍为宜。太干展层太快,引起拖尾;太湿展层太慢。 点样: 点样时,尽量使点样斑点直径小。 点样后,待溶剂挥发后再移入展层缸内,不要用电吹风。 展层: 注意展层剂浸没薄层的一端约0.5cm,不能浸没样品斑点。 层析缸盖子应盖密,减少溶剂挥发。 实验结果和讨论 (一)预习 四环素的硅藻土薄板层析属于哪一种层析机制。固定相和流动相分别是什么? 为了使层析效果好(不拖尾,分离好),操作中注意事项。 (二)实验结果和讨论 在纸上描绘出薄板上斑点的图形,量出各斑点组分的距离,计算Rf值。 分析实验结果。 总结本实验成功或失败的经验教训。 五、思考题 时间安排 星期一:制板 室温晾干 饱和氯化铵缸 星期四:点样 展层 显示斑点 星期四各组自带小刀和直尺 值日生 第一组 第二组 第三组 擦干净实验桌面 整理好试剂药品 扫地、拖地 * * * * * * * * * * * * * 上课前,每组洗干净3块玻璃板、1个研钵、1根研磨棒,去离子水润洗,放入实验室后面的烘箱内烘干,研钵倒扣放置! 按组号签到。 生物分离工程 基础实验 指导教师:龚小雁 张秀萍 生物分离工程实验I 基础实验: 第11/12周 薄板层析法鉴定四环素成品纯度 第14周 PEG400/(NH4)2SO4两水相系统相图的制作 第15周 两水相系统中蛋白质分配系数的测定 第16周 离子交换树脂总交换容量的测定 实验内容及时间 薄板层析法鉴定四环素纯度 实验一班:第11周 周一,周四 实验二班:第12周 周一,周四 两水相萃取相图制作 实验一班:第14周 周一 实验二班:第14周 周四 两水相萃取蛋白质分配系数测定 实验一班:第15周 周一 实验二班:第15周 周四 离子交换树脂总交换容量的测定 实验一班:第16周 周一 实验二班:第16周 周四 实验时间安排表 周次 日期 星期 时间 发酵实验5-212 分离实验5-112 11 5月6日 星期一 13:30   实验一班 5月9日 星期四 13:30   实验一班 12 5月13日 星期一 13:30   实验二班 5月16日 星期四 13:30   实验二班 13 5月20日 星期一 13:30 实验二班   5月23日 星期四 13:30 实验一班   14 5月27日 星期一 13:30 实验二班 实验一班 5月30日 星期四 13:30 实验一班 实验二班 15 6月3日 星期一 13:30 实验二班 实验一班 6月6日 星期四 13:30 实验一班 实验二班 16 6月8日 星期六 13:30 实验二班 实验一班 6月13日 星期四 13:30 实验一班 实验二班 17 6月17日 星期一 13:30 实验二班   6月20日 星期四 13:30 实验一班   考核方式 考勤 提问和操作 实验报告:预习报告 实验结果、讨论、思考题 薄板层析法 鉴定四环素纯度 加深对薄板层析法基本原理的理解。 熟悉薄板层析法的操作过程。 采用薄板层析法来考察四环素制品纯度。 一、目的和要求 (一)层析: 色谱 chromatography 一种分离技术。 任何层析都具有两个相,固定相固定不动,流动相对固定相作相对运动。 不同物质在两相间分配差异,随流动相以不同的速度沿固定相移动,最终达到分离的效果。 固定相:固体或液体(固定在载体上) 流动相:流过固定相的液体、气体或超临界流体。 二、实验原理 (二)层析方法: 根据机理可以分为: 分配层析 吸附层析 凝胶层析 离子交换层析 亲和层析 二、实验原理 根据层析的方式: 纸层析 薄层层析 柱层析 (三)薄板层析(TLC) 利用不同溶质组分在固定相和流动相的两种液体中分配系数不同,展层时形成以不同速度移动的区带,达到分离。 溶质易分配在固定相中 ? 溶质易分配在流动相中 ? 二、实验原理 移动速度慢。 移动速度快。 利用阻滞因子Rf值来表征各组分的差别移动: 0 Rf 1,适宜范围0.2~0.8 二、实验原理 溶质移动距离 同一时间流动相移动距离 Rf= 二、实验原理 固定相:一般为水及各种水溶液、甲酰胺、低级醇等。 流动相(展层剂):与水不溶(或微溶)的有机溶剂。 薄板层析法: 支持物:中性、多孔粉末、无吸附活性、流动相自由通过 ——硅藻土/纤维素/硅胶/氧化铝等,

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