2013年薄板层析法鉴定四环素纯度.ppt

操作注意点 制板： 在研钵中研磨时应缓慢，注意不能产生气泡。 薄板移入饱和氯化铵的缸中时，不宜太干或太湿，以无明显水渍为宜。太干展层太快，引起拖尾；太湿展层太慢。 点样： 点样时，尽量使点样斑点直径小。 点样后，待溶剂挥发后再移入展层缸内，不要用电吹风。 展层： 注意展层剂浸没薄层的一端约0.5cm，不能浸没样品斑点。 层析缸盖子应盖密，减少溶剂挥发。 实验结果和讨论 （一）预习 四环素的硅藻土薄板层析属于哪一种层析机制。固定相和流动相分别是什么？ 为了使层析效果好（不拖尾，分离好），操作中注意事项。 （二）实验结果和讨论 在纸上描绘出薄板上斑点的图形，量出各斑点组分的距离，计算Rf值。 分析实验结果。 总结本实验成功或失败的经验教训。 五、思考题 时间安排 星期一：制板 室温晾干 饱和氯化铵缸 星期四：点样 展层 显示斑点 星期四各组自带小刀和直尺 值日生 第一组 第二组 第三组 擦干净实验桌面 整理好试剂药品 扫地、拖地 * * * * * * * * * * * * * 上课前，每组洗干净3块玻璃板、1个研钵、1根研磨棒，去离子水润洗，放入实验室后面的烘箱内烘干，研钵倒扣放置！ 按组号签到。 生物分离工程 基础实验 指导教师：龚小雁 张秀萍 生物分离工程实验I 基础实验： 第11/12周 薄板层析法鉴定四环素成品纯度 第14周 PEG400/(NH4)2SO4两水相系统相图的制作 第15周 两水相系统中蛋白质分配系数的测定 第16周 离子交换树脂总交换容量的测定 实验内容及时间 薄板层析法鉴定四环素纯度 实验一班：第11周 周一，周四 实验二班：第12周 周一，周四 两水相萃取相图制作 实验一班：第14周 周一 实验二班：第14周 周四 两水相萃取蛋白质分配系数测定 实验一班：第15周 周一 实验二班：第15周 周四 离子交换树脂总交换容量的测定 实验一班：第16周 周一 实验二班：第16周 周四 实验时间安排表 周次 日期 星期 时间 发酵实验5-212 分离实验5-112 11 5月6日 星期一 13:30 　 实验一班 5月9日 星期四 13:30 　 实验一班 12 5月13日 星期一 13:30 　 实验二班 5月16日 星期四 13:30 　 实验二班 13 5月20日 星期一 13:30 实验二班 　 5月23日 星期四 13:30 实验一班 　 14 5月27日 星期一 13:30 实验二班 实验一班 5月30日 星期四 13:30 实验一班 实验二班 15 6月3日 星期一 13:30 实验二班 实验一班 6月6日 星期四 13:30 实验一班 实验二班 16 6月8日 星期六 13:30 实验二班 实验一班 6月13日 星期四 13:30 实验一班 实验二班 17 6月17日 星期一 13:30 实验二班 　 6月20日 星期四 13:30 实验一班 　 考核方式 考勤 提问和操作 实验报告：预习报告 实验结果、讨论、思考题 薄板层析法 鉴定四环素纯度 加深对薄板层析法基本原理的理解。 熟悉薄板层析法的操作过程。 采用薄板层析法来考察四环素制品纯度。 一、目的和要求 （一）层析： 色谱 chromatography 一种分离技术。 任何层析都具有两个相，固定相固定不动，流动相对固定相作相对运动。 不同物质在两相间分配差异，随流动相以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。 固定相：固体或液体(固定在载体上) 流动相：流过固定相的液体、气体或超临界流体。 二、实验原理 （二）层析方法： 根据机理可以分为： 分配层析 吸附层析 凝胶层析 离子交换层析 亲和层析 二、实验原理 根据层析的方式： 纸层析 薄层层析 柱层析 （三）薄板层析（TLC） 利用不同溶质组分在固定相和流动相的两种液体中分配系数不同，展层时形成以不同速度移动的区带，达到分离。 溶质易分配在固定相中 ? 溶质易分配在流动相中 ? 二、实验原理 移动速度慢。 移动速度快。 利用阻滞因子Rf值来表征各组分的差别移动： 0 Rf 1,适宜范围0.2~0.8 二、实验原理 溶质移动距离 同一时间流动相移动距离 Rf= 二、实验原理 固定相：一般为水及各种水溶液、甲酰胺、低级醇等。 流动相（展层剂）：与水不溶（或微溶）的有机溶剂。 薄板层析法： 支持物:中性、多孔粉末、无吸附活性、流动相自由通过 ——硅藻土/纤维素/硅胶/氧化铝等，