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植物细胞融合技术（补充） 周有文 概念（补充1） 亚原生质体-原生质体融合： Subprotoplast-protoplast fusion 小原生质体：Miniprotoplast 微原生质体：Microprotoplast 胞质体：Cytoplast 原生质体(protoplast)：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。 亚原生质体(subprotoplast)：在原生质体分离过程中，有时会引起细胞内含物的断裂而形成一些较小的原生质体就叫做亚原生质体。它可以具有细胞核或没有细胞核。 核质体(nuclearplast)：由原生质膜和薄层细胞质包围细胞核形成的小原生质体。也称为微小原生质体(miniprotoplast)。 胞质体（cytoplast）：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 微原生质体融合 植物微原生质体融合是在此基础上发展起来的将一种植物的一条或几条染色体转移到另一种植物中的新的非对称原生质体融合的方法。 其原理是采用适当浓度的微核诱导剂，包含DNA合成抑制剂和纺锤体毒素两大类，常用的如秋水仙素(COL)、安磺灵(oryzalin)、草胺磷除草剂(eremart)、甲基氨草磷(ApM)、甲氨喋吟(MTx)、氯苯胺灵(CIPC)等。 这些药剂可使正在分裂的植物细胞停留在有丝分裂中期，数小时后，染色体解开螺旋，形成内含多个微原生质体的微核化细胞，每个微原生质体内含有一条或几条染色体，由于有丝分裂停留在中期，每条染色体的两个姐妹染色单体仍在一起，着丝点不分开。通过酶解去掉微核化细胞的细胞壁获得微核化原生质体，再用离心等技术分离出带有一条或几条染色体的微原生质体，诱导其与完整的受体原生质体融合，从而实现部分基因组的转移。 微原生质体融合主要包括3个步骤:微原生质体诱导、分离以及富集、微原生质体融合和植株再生。 无性杂交(asexual hybridization):使两个亲本的原生质体融合成为一个具双亲遗传物质的杂种细胞，并在人工培养下使之形成杂种果树的杂交方法。无性杂交不受亲缘关系限制，特别是某些不能有性杂交的果树，可以采用无性杂交方法育种，培育新的果树类型。其选择杂交亲本的范围比有性杂交更广泛，遗传基础更复杂。 超性杂交(Parasexual hybridization) ：又称准性生殖，不经过减数裂就能导致基因重组的生殖过程称为准性生殖。 细胞操作（或细胞工程）:利用细胞融合和显微操作等方法对生物体的基本单位-细胞(包括体细胞和生殖细胞)直接用手操作,创造出对人类有价值的物质和生命体的技术。包括细胞融合技术、细胞器移植、染色体工程和组织培养技术。 细胞操作、染色体操作以及基因操作的关系密切，有时统称细胞操作。 举例说明细胞融合和技术 三白草和鱼腥草原生质体融合 1、材料 三白草科(Saururaceae)是古草本类中的一个稳定成分，对研究被子植物起源和早期演化具有重要意义。它是一个古老的残存小科，现仅存4属6种，其中有3属4种分布于东亚，2属2种分布于北美，呈典型的东亚一北美间断分布。在我国的主要分布情况是: 三白草产河北、山东、河南和长江流域及以南各省区 鱼腥草分布于甘肃、陕西以南，东至台湾，西南至云南、西藏，湖南全省广布; 2、试剂及试液 2.1 CPW溶液 2.2 混合酶液的组成 2.3 融合液的组成 2.4 原生质体培养基 CPW溶液 该溶液用于配制酶溶液，或分离原生质体以后纯化原生质体时作为清洗液用，其常用配方如下: 为保持分离原生质体过程中的高掺状态，在上述溶液中加入了甘露醇或蔗糖: CPW9M溶液是含有9%甘露醇的CPW溶液; CPW13M溶液是含有13%甘露醇的CPW溶液; CPW21S溶液是含有21%蔗糖的CPW溶液。 混合酶液的组成 混合酶液主要有纤维素酶、果胶酶、甘露醇、CaCI·2H20(mg/L)、MES ，KH2PO4;H20组成，前三者各选用了三个不同浓度。 融合液的组成 原生质体培养基 3、仪器设备及试剂 方法 关于振荡培养  非对称体细胞融合获得花椰菜 （Brassica oleracea L.var. botrytis） 与Brassica spinescens的种间杂种 受体基因型的筛选 以花椰菜、结球甘蓝等甘蓝品种（Brassica oleracea L.）为材料，通过下胚轴原生质体培养筛选合适的基因型作为原生质体非对称融合的受体材料。 供受体原生质体制备 供体Brassica spinescens叶肉原生质体来自培养在光照条件下的无菌苗伸展幼叶，受体花椰菜原生质体来自在黑暗条件下萌发5~6d的无菌苗下胚轴。供、受体材料原生质体游离、纯化和溶液配制参照Ryschka的方