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生物技术通报
·研究报告· B10TEcHNoLoGY8ULLETlN 2012年第6期
青杆均一化eDNA文库构建及EST序列分析
张盾 刘亚静李长江 曹一博 张凌云
(北京林业大学森林培育与保护教育部莺点实验室，北京100083)
摘要：
原始文库．利用基因组DNA饱和杂交技术时原始eDNA文库进行均一化处理。构建青杆的均一化全长cDNA文库。文库的总库客
量为1．1×106CFU／mL。平均插入片段长度大于1．0kb，重组率大于95％。定量RT．PER检测表明．青杆高丰度表达基因EFl．n在
均一化eDNA文库中的表达量下降了约41倍。接着对文库中随机的5
sequencetag)序列为5144奈，经拼接共获得单一基因(unigene)为2
089个。NCBI同源比对分析表明，其中1
序列(singht)2
转导、转录、抗逆、能量代谢等功能。这些数据有助于对青杆的相关功能蛋白履分子机制开展进一步的研究。
关键词：青杆均一化eDNA文库EST序列分析
ConstructionofNormalizedcDNA and of
LibraryAnalysis
EST inPicea
CorrespondingSequenceswilsonii
DunLiu Li CaoYibo
Zhang YajingChangjiang Zhang“ngyun
Silvicultureand
(KeyLaboratoryofForest Conservation旷MinistryofEducation,BeijingForestryUniversity,＆咖昭100083)
eDNA wasconstructed and
Abstract：The library withthe needlesofPiceawilsoniirecombination
primaryfull—length pollen using
ofthe eDNAswiththe donorvectorof ofthe eDNA werenormalized
full-length Gateway pDONR222．Theplasmidsprimarylibrary through
seif-subtractianwiththePiccawilsoniia thenormalized eDNA wasconstructedthesubtracted
genomeDNA，and full—lengthlibrary using
hadatotalCFUof X106
normalized eDNA 1．1 CFU／mL．Thesize．ofinsertedeDNAsWaS1．0kbwith
plasmids．The full·lengthlibrary average
arecombinationofabout RT-PERresultsdemonstratedthatnormalizationaboutfolds reduction
41 ofa
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