过量表达沙冬青巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI 提高大肠杆菌低温与热胁迫抗性.pdf

2010 16 3 ): 341~346 2010-06-25 应用与环境生物学报 ， ( Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X DOI: 10.3724/SP.J.1145.2010.00341 过量表达沙冬青巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI 提高大肠杆菌低温与热胁迫抗性* 刘瑞玲 刘美芹 史军娜 陈玉珍 卢存福** 100083 （北京林业大学生物科学与技术学院，林木育种国家工程实验室 北京 ） 摘 要 沙冬青是我国北方内蒙古荒漠地区特有的常绿阔叶灌木，具有很强的抗低温、干旱、盐碱能力，是重要的抗逆 基因资源植物. 将从低温诱导的沙冬青幼苗中克隆获得的巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI 亚克隆后构建到原核表达载体 pTWIN1上，得到重组表达载体pT-PI ，双酶切及测序结果证明pT-PI 已经构建成功. 将pT-PI转入大肠杆菌 ER2566 中，经 3 异丙基β-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后，SDS电泳检测发现有M 35 ×10 的目的融合蛋白表达，与预测结果一致， r 其中以在 37 ℃诱导诱导3~4 h条件下表达量最高，表明目的基因AmPI 在大肠杆菌中得到了成功表达 . 分别测定了低温（0 ℃）和）和��胁迫（胁迫（50 ℃）条件下）条件下AmPI 宿主菌的生存能力，结果表明AmPI 的表达能提高宿主菌的存活率，可能是AmPI 对细 胞具有保护功能 . 图9 参28 关键词� 沙冬青；AmPI ；大肠杆菌；融合蛋白；过量表达；非生物胁迫 CLC Q786 : Q946.1 Heterologous Expression of Ammopiptanthus mongolicus Cysteine Proteinase Inhibitor Gene AmPI Enhances Escherichia coli Viability Under Cold and Heat Stresses* LIU Ruiling, LIU Meiqin, SHI Junna, CHEN Yuzhen LU Cunfu** (College of Biological Sciences and Biotechnology, National Engineering Laboratory for Tree Breeding, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China) Abstract Ammopiptanthus mongolicus is the only evergreen broad-leaved shrub endemic to the Alashan desert in Inner Mongolia, China, and can survive at –30 ℃ or even lower in winter. One cold-induced cysteine proteinase inhibitor gene AmPI from A.