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临床生物化学检验常用技术 第一节 光谱分析技术 一、光谱分析技术的基本原理： 3、物质对光吸收的基本原理： 能量转移 ----当光辐射通过某种物质时，组成该物质的分子（原子）与光子发生“碰撞”，光子的能量因此转移至分子（原子）上，使它们由基态(低能态)跃迁到激发态(高能态)，这种跃迁称为激发。 选择吸收 ----组成物质的分子仅吸收与其内能变化(基态与激发态能量差)相对应的波长或频率的光，所得到的光谱称为吸收光谱。? （1）根据产生光谱的物质结构 原子光谱 (atomic spectrum) 分子光谱 (molecular spectrum) （2）根据光谱获得的方式不同 ① 吸收光谱（Absorption spectrum）分析法： 根据溶液能吸收由光源发出的某些波长的光后所形成的特征光谱来鉴定该物质的性质和含量的方法。 紫外-可见分光光度法 (ultraviolet and visible spectrophotometry) 原子吸收光谱法 (atomic absorption spectrophotometry) 红外光谱法 (infrared spectrometry) ② 发射光谱(emission spectrum)分析法： 根据物质受到热能或电能等的激发后所发射出的特征光谱来进行定性及定量分析的一种方法。 原子发射光谱法 (atomic emission photometry) 分子发光分析法 2、特点： 仪器设备和操作简单 费用少，分析速度快 灵敏度高(10-4~10-7g/mL) 选择性好 精确度和准确度高 3、应用： （一）光吸收的基本定律 1、定律： 单色光通过吸光溶液后，吸光度与溶液的浓度和厚度之间呈正比关系。 （1）Lambert定律： 说明吸收与溶液液层厚度间的关系 （2）Beer定律： 说明吸收与溶液浓度间的关系 2、表达式： -lgI/Io=-lgT=K?L?C A=- lgT=K?L?C I/Io为透光率(Transmittance, T) A为吸光度(Absorbance) K为吸光系数(absorptivity) L为液层厚度 C为溶液浓度(concentration) 2.单色器 3. 样品室 （三）分光光度计的类型 3.双波长 使用图示 5.盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过率“100%T”旋钮，使数字显示为“100.0T” （如果显示不到100%T，则可适当增加灵敏度的档数，同时应重复“2”，调整仪器的“00.0”）。 第二节 电化学分析 电化学分析方法 电化学分析是利用物质的电化学性质，测定化学电池电位、电流或电量的变化进行分析的方法。 一、电化学分析方法基本原理 电位分析法是利用电极电位和浓度之间的关系来确定物质含量的分析方法。 二 离子选择性电极 4、离子选择性电极分类 5、离子选择性电极的基本构造 膜电极的构成 1、电极杆 （玻璃或塑料管） 2、内参比电极 （银－氯化银） 3、内参比溶液 4、敏感膜 （关键部件） （一）非晶膜电极—玻璃电极 内参比电极： Ag—AgCl电极。 玻璃泡：敏感膜 内参比溶液： pH一定的缓冲溶液。 （2）玻璃电极及膜电位： 玻璃电极是最早使用的离子选择性电极。 玻璃薄膜是决定电极性能的最重要组成部份。 内参比电极的电位是恒定的，与被测溶液的PH无关。 玻璃电极用作测PH的指示电极，是因为跨越玻璃膜产生了膜电位。膜电位与待测溶液PH值有关。 在任意温度T下： 根据此公式，通过测定玻璃电极的电极电位，可求出膜外试 液的H+活度。这是使用玻璃电极测量pH的理论根据和基本 计算关系。 3.玻璃电极的优点 选择性高 ：膜电位的产生不是电子的得失。其它离子不能进入敏感膜产生交换。当溶液中Na+浓度比H+浓度高1015倍时，两者才产生相同的电位； 不受溶液中氧化剂、还原剂、颜色、沉淀及胶体、杂质的影响，不易中毒；