第八章吸光光度法3.pptVIP

第 八 章 吸 光 光 度 法 吸光光度法是基于物质分子对光的选择性吸 收而建立的一种分析方法。 可见分光光度法------ Visible Spectrophotometry 8.1 物质对光的选择性吸收 许多物质是有颜色的，物质之所以呈现五彩缤纷的不同颜色，就是因为选择性地吸收了某些特定波长的可见光所致。例如：高锰酸钾为紫色；重铬酸钾为橙色。 有色溶液颜色的深浅，与有色物质的浓度成正比。 光是电磁波中的一个很小波段。 白光属于复合光 一束白光（复合光）通过三棱镜分光，便可得到红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等色光，这些色光也并非原来意义上的单色光（因其不纯）。 互补光：将红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等色光按一定比例混合，就可得到白光。 物质颜色与吸收光波长的关系 8.2 朗伯-比尔定律 朗伯-比尔定律 ： 朗伯-比尔定律 通常写为以下两种形式： ① ② 吸光度具有加和性： 在多组分体系中，如果各种吸光物质之间彼此不发生作用，这时体系总吸光度就等于各组分吸光度之和，这一规律称为吸光度的加和性。 3 分光光度法 可见光分光光度法的测定方法和原理与光电比色法相同，但获得单色光的方法不同。 光电比色法：滤光片 分光光度法：棱镜、光栅 —— 单色器 分光光度法采用的仪器是分光光度计。 分光光度计的种类和型号繁多，常见的国产分光光度计有 721 型、 721A 型、 721B 型以及 722 型等。 分光光度计的主要组成部件是： 光 源 单色器 吸收池 检测系统 （3）吸收池 也叫比色皿, 用于盛装参比溶液和待测溶液，能透过所需光谱范围内的光线。 （4）检测系统 检测器 将透射光信号转化为电信号进行测量的装置。包括：硒光电池（易疲劳）、 光电管（灵敏度高、不易疲劳）。 指示器 把放大的信号以适当的方式显示或记录下来。和检测器一起组成检测系统。 8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度 灵敏度的表示方法 1．摩尔吸光系数 摩尔吸光系数 表示浓度为1mol/L的有色溶液，其液层厚度为1cm时的吸光度。 例 0.0880mg Fe3+在酸性溶液中，以硫氰酸钾显色后，用水稀释到50.00ml，在480nm处用1cm比色皿测得吸光度A为0.220，计算该显色反应的摩尔吸光系数。 解 已知A＝0.220，b=1cm 2．桑德尔（Sandell）灵敏度S 桑德尔灵敏度S表示：规定仪器的检出极限A=0.001时，单位横截面积液柱内能够检出的物质最低含量为桑德尔灵敏度。 单位： 3. 摩尔吸光系数与桑德尔灵敏度之间的关系： 8.4 显色反应及其影响因素 利用吸光光度法进行分析，被测定物质往往需要颜色，即对某一特定波长的光具有很强的吸收。若被测的物质本身有色，则可直接测量，如被测物无色（或太浅）时，往往要选择适当的显色剂对其进行显色。 (1) 显色反应及其选择 将待测组分转变成有色化合物的反应叫做显色反应。 与待测组分形成有色化合物的试剂称为显色剂。 选择显色剂应考虑的因素： ① 灵敏度高：一般希望 ε 达到104 ~ 105 ② 选择性好：其它离子干扰少 ③ 显色剂在测定波长处无明显吸收 ④ 反应生成的有色化合物组成恒定，化学性质稳定。 显色剂 无机显色剂 种类不多，主要有硫氰酸盐、钼酸铵等。 有机显色剂 有机显色剂种类很多，主要可分为： 偶氮类显色剂 如偶氮胂Ⅲ 三苯甲烷类显色剂 如结晶紫 其它有机显色剂 如丁二酮肟 显色剂用量 显色剂不能太少，也不能太多，适宜的用量可通过实验测定。 反应体系的酸度 显色反应的温度 显色反应的时间 干扰的消除 （2）吸光度测量条件的选择 入射光波长的选择 入射光的波长应根据吸收光谱曲线选择，选择的原则是吸收最大，干扰最小。 一般情况下选择被测溶液的最大吸收波长为入射光波长。这样测定的灵敏度和准确度都较高。 如果干扰物质在最大吸收波长处有强烈的吸收，则可选其它波长，但要注意尽可能选择值随波长改变而变化不太大的范围内的波长。 参比溶液的选择 在吸光度测量中，将发生反射、吸收