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提要
论文研究的主要内容是利用毛细管电泳法测定中草药及食品中的氨基酸。
第一章主要讲述了两部分内容,一部分是对氨基酸及氨基酸衍生剂的简单介
绍,另一部分是对毛细管电泳发展史、原理、进样技术、检测技术、分离模式、
前景的介绍。
第二章采用超声提取法对金银花中的游离氨基酸进行提取,以 2,4-二硝基氟
苯(DNFB )为衍生剂,用微波衍生法来衍生氨基酸,最后用毛细管电泳法测定
了金银花中的游离氨基酸。对影响 DNFB 与氨基酸衍生反应和氨基酸衍生物分
离的因素进行了优化。在最佳实验条件下,测定了 3 种金银花中游离氨基酸。
第三章采用微波水解法水解了奶粉中的蛋白质,利用微波衍生法使氨基酸和
衍生剂 CNBF 的衍生反应进行完全,用胶束毛细管电泳法测定了奶粉中的氨基
酸。使用了微波水解法和微波衍生法,微波水解可以快速地水解蛋白质,微波衍
生可以使氨基酸迅速衍生,并与传统的水解和衍生方式相比,得到的氨基酸的含
量无明显差异,但大大缩短了分析时间。本章还优化了微波水解和微波衍生反应、
分离条件的影响因素。在最优的实验条件下,测定了奶粉样品中的氨基酸。
I
论文摘要
微波衍生毛细管电泳法测定金银花和奶粉中的氨基酸
作者姓名:赵雅静
专业:分析化学
指导教师:张寒琦教授
氨基酸是蛋白质,例如激素、代谢调节物、酶、神经递质和生长因子等的最
基本组成单位,这些蛋白质在生物体内发挥着重要作用。而且现在氨基酸在实际
生活中也有重要应用,例如饲料添加剂、保健品、化妆品、医药中都含有氨基酸。
因此对于氨基酸含量的研究是非常重要的。
氨基酸的衍生反应普遍在水浴加热下进行,但是这种衍生方式所需时间比较
长。而微波衍生法可以在较短的时间内使氨基酸衍生完全,并且与传统的加热衍
生相比,衍生效果并无明显差异。毛细管电泳法的优点十分显著,例如分析速度
快、进样体积小、试剂用量少、一般在水溶液中进行以及自动化程度高。
采用毛细管电泳法测定金银花中的游离氨基酸,考察了各种影响因素并对其
进行了优化。采用 0.005 mol/L 的盐酸溶液,超声提取金银花样品中的游离氨基
酸,并对提取出的氨基酸用 2,4-二硝基氟苯(DNFB )微波辅助衍生后用毛细管
电泳法(CE)检测。微波功率在 150 W 时 30 s 就可使反应完全,这大大缩短了衍
生时间。缓冲溶液的硼砂浓度为 40 mmol/L ,pH 为 9.5 。毛细管电泳法的分离效
率比较高,在 20 min 内将氨基酸分离。氨基酸的浓度在0.50-50.00 μg/mL 的范围
内,氨基酸衍生产物的峰面积和氨基酸浓度有良好的线性关系,线性相关系数大
于 0.999 。应用本方法对金银花样品中的游离氨基酸含量进行测定,取得了满意
的结果。氨基酸的加标回收率在 64.21-118.45%范围内。
采用胶束毛细管电泳法测定了奶粉中的氨基酸,并对影响实验的条件进行了
优化。在微波温度 130 ℃下,保持 15 min 就可以将奶粉中的蛋白质水解完全,
并与传统的水解方式得到的氨基酸的量差别不显著。将氨基酸与 4-氯-3,5-二硝基
三氟甲苯(CNBF )溶液在 pH=9.0 的硼砂缓冲溶液中反应,该反应在微波功率
为 240 W 的条件下反应 90 s,就可以使反应完全。背景电解质中含25 mmol/L 的
硼砂、50 mmol/L 十二烷基硫酸钠(SDS)、20 mmol/L 1-丁基-3- 甲基四氟咪唑
硼酸盐([BMIM]BF )和7.5% (v/v) 异丙醇,溶液的 pH 为 9.5,18 种氨基酸用
4
II
胶束毛细管电泳可以完全分离。氨基酸标准曲线的线性相关系数都
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