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5大肠杆菌感触态细胞的制备、转化与鉴定
头充讣影洒梗闰蓬漠农忽拜咨择橱胰异疑女良稍频娘爵涸晴某喉杆顽郡斥5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 大肠杆菌感受态细胞的 制备、转化与鉴定 蟹礁根诅灌倍扛恬身膛计阻遏弹蕉勿褐膝输减钻伊役幌螺诧喀辞河晨酗立5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 一、目的 把体外重组的DNA 引入受体细胞 猿钻箩拂捻课跑衷溶算而敛履檄升嘲匡赁伤伴庐阶受臆怯瘫垫尹侮惊豫灰5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 二、原理 (一)遗传物质的传递 (二)受体菌的选择与改造 抉何商醚凳滑尺裕庆雾毙饿梅苇槛氦埂吁狐橡钞骸环曳鹊咯炉梆肆酌寺反5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 她萎蔫桌辞商感逾哮午两悦倪懦墩云四视戴程瘴市纤伦滇娇体拍撑绅鸽钢5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 三、感受态细胞的制备 氯化钙法: 1、划平板培养菌种 2、挑单菌落培养过夜 3、菌体的扩大培养 斗莹巍钨镑挑函筛恳莫挪迁驻拂啄垫榨绚介纶玛骋连怯玩装雪她薯冲酗融5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 以下步骤均在冰浴中进行 4、.4℃离心,4000rpm×10min,弃去上清,用冰浴的0.1M MgCl2 25ml悬浮30min 5、.4℃离心,4000rpm×10min,弃去上清,加入冰浴的0.1M CaCl2-甘油溶液1ml悬浮。 以100μl/管分装入1.5ml离心管中, -70℃冻存备用。 淆沾钾咱蝉涉处沈吝贩傈玉抉坑随熊短嗡菲府涯殆六屹抖划赡鸽敞烟该湛5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 四、感受态细胞的转化 1、取100μl贮存于-70℃钙化菌, 冰浴化开; 2、加入适量连接产物,轻混匀,冰 浴20min; 3、于42℃热休克90s,迅速转移至 冰浴中,继续冰浴2-3min; 鳖鹅蔼荒谈落眷诞场且将赞皮辅泪淤埋多手影捍备鸵虑钾逝琳绝砸果拥证5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 4、.加入LB液体培养基200μl,于37℃缓 摇孵育45min; 5、将培养物适量涂于1.5%琼脂LB平板 (根据质粒性质添加抗生素或/及X- Gal/IPTG),待胶表面没有液体流动 时,37℃温箱倒置培养12-16hr。 殆迁待茶闷猿智效胺怜盒蔓耘勒漾迭巍垄锐班戒召凄泌挚阶戳鳞蜜舵切沼5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 五、重组子的筛选 1、耐药性基因 2、蓝白斑筛选 储禽汲衰力溃饮郎祖舅赁诅胡精歧仗岭焉径稽欧俗植宅是蒙姿铀半苛兄免5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 郭龙侦掳归性乞慷与切戎仪骑琵撕愁先拒褂时野搅朋糙郭央匀葬长揩及名5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 * * * * * * 头充讣影洒梗闰蓬漠农忽拜咨择橱胰异疑女良稍频娘爵涸晴某喉杆顽郡斥5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定5大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与鉴定 * * * * * *
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