光谱法研究木糖醇与人血清白蛋白的相互作用.pdfVIP

第 32卷 第 1期 广西师范大学学报 ：自然科学版 Vol_32 NO．1 2014年 3月 JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEdition M ar．2O14 光谱法研究木糖醇与人血清 白蛋 白的相互作用 杨国平 。，杨 峰 (1．广西师范大学 化学与药学学院，广西 桂林 541004； 2．广西师范大学 药用资源化学与药物分子工程国家重点实验室培育基地 ，广西 桂林 541004) 摘 要 ：本文采用荧光猝灭光谱和紫外一可见吸收光谱研究木糖醇与人血清 白蛋 白(HSA)的相互作用 。结果 表 明木糖醇对 HSA有较强的荧光猝灭作用 ，荧光猝灭机理属于二者形成复合物所 引起 的静态猝灭和非辐射 能量转移 ；根据不 同温度下木糖醇对 HSA的荧光猝灭作用 ，利用 Stern-Volmer方程处理实验数据 ，得到木糖 醇与 HSA之间的结合常数 K^为 2．46×10mol ·L(298K)和 lIO1×10mol ·L(308K)，结合位点数 ” 分别为 0．9228和 0．9970。根据不 同作用温度时非共价结合复合物的热力学参数变化 ，证 明木糖醇与人血 清 白蛋白分子间的结合力主要是静 电引力 。研究结果为进一步研究木糖醇的药理和保健作用 ，尤其是对血浆 蛋白构象的影响和新药品的开发提供 了重要信息。 关键词 ：木糖醇 ；人血清 白蛋 白；相互作用 ；荧光猝灭 中图分类号 ：Q512．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—6600(2014)01—0095—05 天然产物活性成分与蛋白质的相互作用研究已成为当今的研究热点之一 口]。木糖醇是从 白桦树 、橡 树 、玉米芯、甘蔗渣等植物 中提取出来的天然植物甜味剂，可 以做营养补充剂 、辅助治疗剂。木糖醇是人体 糖类代谢 的中间体 ，能促进肝糖元合成 ，具有防龋齿特性 ，可广泛用于食品、医药 、轻工等领域 ]。研究木 糖醇与人血清 白蛋白的相互作用对研究木糖醇的药理和它在有机体内的分布来说非常重要 。人血清 白蛋 白是血浆 中含量最丰富的蛋白成分 ，是 由585个氨基酸组成的单链状的球形蛋 白。人血清 白蛋 白能够结 合大量的各种底物，包括金属阳离子、脂肪酸、氨基酸和各种各样 的药物 。值得令人关注的是各种药物结 合到 HSA上显示 出各种药物的分布、自由度和新陈代谢等的改变_l5]。因此，探讨药物与人血清 白蛋白问 的相互作用 ，能够提供药物的有意义的信息，并且能够作为一个模型来说明药物与蛋白的络合 。]，对探讨 药物在体 内的代谢过程及临床合理用药具有重要的指导作用_8 。 本实验运用荧光光谱和紫外光谱研究木糖醇和人血清白蛋白(HSA)的相互作用 的光谱特征，由荧光 猝灭现象和 Forster非辐射能量转移理论求得了木糖醇和 HSA 的结合常数、结合位点和结合距离 ，并从 热力学参数推出二者之间的作用力类型。 1 实验部分 1．1 实验仪器和材料 RF一5301PC 荧 光 光度 计 (Shimadzu)；Cary一100UV—Visspectrophotometer紫外 分光 光度 计 (Varian)；AI一204电子分析天平 (梅特勒 ·托利多 (上海)有限公司)；pHS3C型数字酸度计 (上海智光仪 器仪表有限公司)。 人血清 白蛋 白、木糖醇 (美 国Sigma公司)；Tris—HC1缓冲液 ，pH7．4；实验所用试剂均为分析纯 ，实验 用水为超纯水 。 收稿 日期 ：2013—11-11 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目21171043)；广西 自然科学基金资助项 目(2012GXNSFCB053001) 通信联系人 ：杨峰(1974一)，男，江西东乡人 ，广西师范大学教授 ，博士 。E—mail：jxyangfeng@gmail．com 广西师范大学学报 ：自然科学版 第 32卷 1．2 实验方法 准确移取 3mI1 mol／LHSA于比色皿 中，用 Tris—HCI缓冲液调 pH值 ，分