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农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12 1冤院 48~51
·研究论文·
微管蛋白荧光探针的制备及其在蚕豆叶片保卫细胞中的组装*
1, 2 2 2
荣 袁 明 王学臣 **
(1.首都师范大学生物系，北京 100037 ；2. 中国农业大学生物学院植物生理生化国家重点实验 ，北京 100094 ）
摘要: 从新鲜猪脑中提取微管蛋白(两个循环的解聚 聚合超速离心) ，经DEAE-Sephadex A50 离子层析纯化及罗丹明荧光
标记，得到浓度为10.8 mg/mL 和染料蛋白比0.6 (Dye/Protein=0.6)的猪脑微管蛋白荧光探针。将其显微注射于蚕豆( L.)叶
片下表皮的保卫细胞中，激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope, CLSM)下观察，发现该荧光标记微管蛋白可
， 。在开放气孔 ，
以顺利地组装到保卫细胞的微管骨架上 5~ 10 min 即可清楚地观察到整合于保卫细胞中的微管网络 保卫细胞中 周
质微管（cortical microtubule ）沿细胞的腹壁向背壁辐射状排布；而关闭气孔保卫细胞中周质微管则解聚为零碎小片段。以上实验
结果为在活体条件下， 一步精细研究气孔运动过程中保卫细胞微管骨架的动态变化提供了可靠的实验基础。
关键词: 微管蛋白荧光探针; 显微注射; 蚕豆保卫细胞; 组装
Preparation of Rhodamine-labelled Tubulin and Its Reassembly in
Guard Cells of Leaves ( L.)
1,2 2 2
YU Rong YUAN Ming WANG Xue-Chen **
( 1. Department of Biology, Capital Normal University, Beijing 100037, China;
2. State Key Laboratory of Plant Physiology and Biochemistry, China Agricultural University, Beijing 100094, China)
From fresh pig brain, tubulin was extracted (two cycles of polymerization and depolymerization), purified
(chromatography of DEAE-Sephadex A50) and labeled with 5(6)-TAMRA, SE. We pr
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