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沙门氏菌的生物学特点及鉴定要点
沙门氏菌的生物学特性及鉴定要点
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1. 形态与染色:革兰氏阴性杆菌,菌体细长,有周鞭毛。
2. 培养特性:在麦康凯平板上35℃培养18~24小时,形成无色、透明的菌落。SS平板上显无色、透明菌落,但大部分菌落中央显黑色(产H2S)
沙门氏菌分为6个亚属,2200多个血清变型。D群中的伤寒沙门氏菌是临床上最为重要的沙门氏菌。
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3.生化反应:
氧化酶(-),发酵葡萄糖,乳糖(-),TSI或KIA为K/A,有动力,赖氨酸脱羧酶(+),硝酸盐还原试验(+),大多菌主H2S(+)。
KIA:斜面(K),底层(A),
H2S(+)或(-)
MIU:动力(+),吲哚(-),脲酶(-)
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4.鉴别要点:
4.1 本菌属特点:选择SS平板上无色透明、半透明或中心黑色的菌落,TSI为K/A,H2S(+)或(-),动力(+),氧化酶(-),脲酶(-)
符合上述特性者,可通过血清凝集试验做出诊断。
4.2 与志贺菌属的鉴别:少数伤寒沙门氏菌在TSI或KIA上H2S(-),动力不明显,易于志贺氏菌相混淆,可用血清凝集试验相鉴别。
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5.操作步骤
5.1 观察菌落特征,挑取可疑菌落做KIA,MIU或TSI初筛。
5.2 血清学鉴定
5.3 从SS平板上挑取纯菌落,传统生化反应进行菌落坚定。
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5.4 初步鉴定
KIA
斜面、底层、产气、H2S
MIU
动力、吲哚、脲酶
诊断血清凝集
甲型副伤寒
K A + -/+
+ - -
AFO多价+ A+
乙型副伤寒
K A + ++
+ - -
AFO多价+ B+
丙型副伤寒
K A + ++
+ - -
AFO多价+ C+ Vi+
伤寒沙门氏菌
K A - +/-
+ - -
AFO多价+ D+ Vi+
其它沙门氏菌
K A + +
+ - -
AFO多价+ 肠炎+
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6.血清凝集步骤
6.1 筛选:
取营养琼脂斜面(或KIA斜面)培养物与AFO多价抗血清作玻片凝试验,若呈明显凝集,提示被检菌可能属于AFO6个0群范围内,再按0抗原血清凝集定群。若与多价0抗血清不凝集,有如下3种可能:(1),含有Vi抗原
(2),AFO群之外的沙门氏菌
(3),沙门氏菌以外的细菌,按下述方法进一步检验。
将营养琼脂斜面培养物用1ml无菌生理盐水或蒸馏水洗下,制成浓厚菌液,再合成2份,1份不经处理,为洗菌液,另一份放100℃水浴中30分钟,为加热菌液。
取活菌与Vi抗血清,取加热菌与Vi抗血清,AFO多价抗血清分别进行玻片凝集试验。
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根据结果作如下分析:(1)活菌与Vi抗血清凝集,加热菌与Vi抗菌,按下述定群用O7及O9抗血清定群;(2)活菌与Vi抗血清不凝集,可能属于AFO群意外的沙门氏菌或其他菌属细菌,应进行全面生化试验定属,若符合沙门氏菌属细菌特征,宜送专门机构鉴定;(3)加热菌也与Vi抗血清凝集,而与AFO多价O抗血清不凝集者,可报告为阴性。
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6.2 定群
取O2(A群),O4(B群),O7(C1群),O8(C2群),O9(D群),O3.10(E群),O11(F群)分别进行玻片凝集试验。若与其中1种因子血清凝集,可报告为阳性。
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6.3 血清型分析:
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