基因敲除大肠杆菌.pptxVIP

基因敲除提高大肠杆菌工程菌生产异丁醇产量的研究 PART ONE Abstract 3 01 运用red重组系统敲除大肠杆菌BW25113的pflB,frdAB,fnr和AdhE基因 02 构建pflB,frdAB,fnr和AdhE四基因突变株E.coli BW25113H 03 检测该工程菌在1L发酵罐发酵过程中的生物量，突变菌株的稳定性，异丁醇产量及有机酸含量变化情况 PART ONE Technology roadmap 5 引物设计 PCR 感受态制备 电转化 异丁醇产量测定 消抗 PART ONE 7 8 图3 1：验证引物扩增BW25113C 2：假阳性扩增 3-9：BW25113D BW25113C:frdAB基因缺失工程菌，2.1kb BW25113D:kana抗性消除工程菌，750kb 9 图4 图5 BW25113E:fnr基因缺失工程菌，1.5kb BW25113F:氯霉素抗性消除工程菌，550kb 1，2：假阳性扩增 3：BW25113E 4-7：BW25113F BW25113E:fnr基因缺失工程菌，1.5kb BW25113F:氯霉素抗性消除工程菌，550kb 1，2：假阳性扩增 3：BW25113E 4-7：BW25113F BW25113G:adhE基因缺失工程菌，2197kb BW25113H:卡那抗性消除工程菌，600kb 1：BW25113H 2：BW25113G 10 11 结论：pflB基因缺失明显造成了乳酸积累 12 PART ONE 论文不足之处 14 01 图2中待改进的地方 图2中的PCR图片没有标明Maker长度 条带过亮，堆积，有拖带现象 3，4，5孔道点样孔有亮带 原因分析 条带过亮可能是由于上样浓度过高或上样量过多造成的 点样孔有亮带可能原因是样品过量或大分子残留 拖带原因可能是模板太浓或者引物特异性差 综上造成PCR没跑好的最可能原因是上样量过大 论文不足之处 15 02 图7中待改进的地方 该实验高县液相色谱检测只检测了pflB基因敲除菌株发酵过程中有机酸的积累，没有说明其他基因缺陷菌株发酵情况; 分析