原创力文档Establishment and application of mouse parthenogenetic embryonic stem cells小鼠孤雄胚胎干细胞的建立和应用.pdf
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本研究由以下项目资助：
The China National Basic Research Program (No.
2012CB966500, No. 2013CB967100)
The National Science Foundation of China (No.
The National Science Foundation of China (No.
The China National Basic Research Program (No.
2012CBA01300)
The Strategic Priority Research Program of the Chinese
Academy of Sciences （No. XD）
V
目 录
摘 要 5
Abstract 6
1 前言 1
1.1 胚胎干细胞的研究进展 1
1.1.1 啮齿类胚胎干细胞 1
1.1.2 灵长类胚胎干细胞 2
1.1.3 胚胎干细胞的多能性 2
1.2 孤雄胚胎干细胞 4
1.2.1 孤雄胚胎的构建技术 5
1.2.2 孤雄胚胎干细胞的研究进展 5
1.3 孤雄单倍体胚胎干细胞 6
1.3.1 单倍体胚胎干细胞系的建立 6
1.3.2 单倍体胚胎干细胞的特征 7
1.3.3 单倍体胚胎干细胞在转基因上的应用 8
1.4 本研究旨在获得二倍体和单倍体孤雄胚胎干细胞系并研究他们的特征 8
1.4.1 建立具有嵌合能力的孤雄胚胎干细胞 9
1.4.2 获得孤雄单倍体胚胎干细胞 9
1.5 本研究的目的和意义 11
2 材料与方法 12
2.1 实验材料 12
2.1.1 实验动物 12
2.1.2 主要仪器与设备 12
2.1.3主要试剂及试剂盒 13
2.1.4 常用培养基及配制 14
2.2 实验方法 15
2.2.1 显微操作的准备 15
2.2.2 孤雄胚胎的重构 17
2.2.3 孤雄胚胎干细胞的建系 20
2.2.4 孤雄胚胎干细胞多能性的鉴定 21
2.2.5 孤雄单倍体胚胎干细胞向上胚层干细胞分化 23
2.2.6 单倍体上胚层样胚胎干细胞的神经分化 23
2.2.7 卵母细胞胞浆内注射孤雄单倍体胚胎干细胞（Intracytoplasmic injection of
ahES cells, ICAI） 24
2.2.8 对孤雄单倍体胚胎干细胞进行转基因操作 26
Ⅰ
2.2.9 亚硫酸氢盐测序 26
2.2.10 Real-time PCR 27
2.2.11 Western blot 29
2.2.12 CGH芯片实验 29
2.2.13 Microarray 芯片实验 29
2.2.14 ICAI新生异常胎鼠的病理分析 29
3 结果与分析 30
3.1 从 CBHA 处理的孤雄胚胎建立孤雄二倍体胚胎干细胞系 30
3.1.1 CBHA处理的孤雄胚胎比不处理的孤雄胚胎有更高的囊胚率 30
3.1.2 CBHA处理的孤雄胚胎建立孤雄胚胎干细胞系（CaES） 30
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