2017年秋高中生物 DNA和蛋白质技术 5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段课件1 新人教版选修1.pptVIP

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2017-10-12 发布于河北
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2017年秋高中生物 DNA和蛋白质技术 5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段课件1 新人教版选修1.ppt

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2017年秋高中生物 DNA和蛋白质技术 5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段课件1 新人教版选修1

PCR 循环第三步：引物延伸靶序列靶序列第1个 PCR 循环完成后：得到两个拷贝的靶序列 95℃变性（1）PCR循环——变性（1）PCR循环——变性 95℃变性 95℃变性（1）PCR循环——变性 55℃复性（2）PCR循环—复性（3）PCR循环—延伸（3）PCR循环—延伸（3）PCR循环—延伸（3）PCR循环—延伸循环次数 DNA数量 1 2 3 20 30 3、30次循环后靶序列扩增的数量循环次数 DNA数量 1 2 2 4 3 8 20 1,048,576 30 1,073,741,824 3、30次循环后靶序列扩增的数量 4、循环特点： 4、循环特点： ①上一次循环的产物为下一循环的模板 ②结果单链中有最初母链的只两条（无引物存在） ③其它子代DNA分子都为双引物分子 ④处于两引物之间的DNA序列呈指数增长1×2N 5、原料 6、基本条件 4、模板 DNA母链 5、原料脱氧核苷酸 6、基本条件 4、模板 DNA母链 5、原料脱氧核苷酸 6、基本条件酶、ATP、原料、模板 4、模板 DNA母链 7、复制过程 7、复制过程 ?① DNA的解旋 7、复制过程 ?① DNA的解旋　　亲代DNA分子利用细胞提供的能量在解旋酶的作用下氢键断裂，部分双螺旋链解旋为两条平行的双链 DNA聚合酶的特性　　DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。因此，DNA复制需要引物。 ?② RNA引物的合成 ?② RNA引物的合成　　以DNA单链为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ?② RNA引物的合成 ?③ DNA的生成　　以DNA单链为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ?② RNA引物的合成　　以DNA单链为模板，在引物酶的作用下合成小段的RNA引物 ?③ DNA的生成　　以DNA单链为模板，在DNA聚合酶的作用下，在RNA引物的末端由5′端→3′端合成DNA。 DNA合成的方向子链由5′ 端向 3′端延伸　　思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________；用_________________方法　　思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA 如何打开双链？ DNA复制的前提是______________；用_________________方法　　思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA 如何打开双链？双链的解开 DNA复制的前提是______________；用_________________方法　　思考：DNA复制的前提是什么？体外扩增DNA 如何打开双链？双链的解开控制温度 DNA 分子的热变性原理： DNA双链单链 DNA 分子的热变性原理： DNA双链单链复性（缓慢冷却） DNA 分子的热变性原理：变性（加热80-100℃） DNA双链单链复性（缓慢冷却）变性的目的：复性的目的： DNA 分子的热变性原理：变性（加热80-100℃） DNA双链单链复性（缓慢冷却）变性的目的：复性的目的：解开双链有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 DNA 分子的热变性原理：变性（加热80-100℃）思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。思考：高温使DNA解旋，但普通DNA聚合酶会失活，__________________找到耐高温DNA聚合酶。托马斯.布鲁克体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) ①DNA模板； ②分别与两条模板链相结合的两种引物； ③四种脱氧核苷酸； ④耐高温的聚合酶； ⑤ 控制温度，但不需解旋酶。体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件) （三） PCR的反应过程 1、PCR的反应步骤 1、PCR的反应步骤　　PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸（三） PCR的反应过程 ①变性（模板DNA解旋）　　模板DNA加热至900C以上时，模板DNA双链解离，成为单链。 2、循环过程靶序列靶序列 PCR 循环第一步：加热变性 ②复性（退火）　　温度下降到50℃左右，两种引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 PCR 循环第二步：引物与靶序列退火 ③延伸　　温度上升到72℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，以脱氧核苷酸为原料，以母链为模板，按碱基互补配对的原则，合成一条新的DNA链一、基础知识（一）DNA分子的结构一、基础知识 1、组成元素（一）DNA分子的结构一、基础知识 C、H、O、N、P 1、组成元素（一）DNA分子的结构一、基础知识 C、H、