热休克预处理对新生大鼠急性乙醇中毒后HSP70表达及神经细胞凋亡的影响.pdfVIP

——一 塑望查竺堡!=堂堡堡苎 热休克预处理对新生大鼠急性乙醇中毒后HSP70表达及神经细 胞凋亡的影响 浙江大学医学院 内科学(消化系病) 张侃 导师 厉有名教授 摘 要 目的和背景： 乙醇是一种亲神经性毒物，也是酒的主要成分。绝大多数乙醇中毒发生 于饮酒，乙醇对发育中大脑有严重的损伤作用，但其作用机制尚不清楚。近 来的研究大多着重于酒精对成熟动物的慢性作用。美国华盛顿大学医学院 Olney博士领导的研究小组发现，在大脑的发育期间，酒精通过阻断NMDA受 体和过度激活GABA受体的双重机制，广泛地引起大脑中神经元凋亡。研究发 现酒精损伤的作用最敏感的时期正是脑生长发芽(BGS)期，在人类为孕后三 个月(相当于大鼠新生至生后两周)，在这个时期，短暂的酒精接触便会使皮 质、海马、小脑的上百万神经元损害。临床上表现为该期孕妇一次大量饮酒 就可能致胎儿死亡、畸形或生后智力障碍(胎儿酒精综合征， 热休克反应是一切有生命细胞遇短暂高温刺激时发生的一种以基因表达和 调控变化为特征的细胞应激反应，其产生的一组蛋白质即热休克蛋白(heat shock protin，HSP)已有文献报道对多种应激情况如中风、神经变性的疾病、 癫痫、重金属中毒、氧化应激、感染、创伤和代谢毒物下的细胞有保护作用， 指引我们去研究他在诱导耐受中潜在的保护效应。国内外已有研究报道热应 2 —— ．一 一 望!型查堂竺：!兰些笙墨 激处理可对抗中毒损伤如暴露在谷氨酸盐中培养的小脑细胞，预先的热休克 和亚致死缺血可保护细胞免于其后的脑缺血、缺氧损伤，但有关热预处理能 否减少脑发育期急性酒精中毒损伤，研究较少。本实验是从形态学及分子生 物学角度来探讨热休克预处理对发育期脑细胞急性酒精中毒损害的影响。 本文通过腹腔注射中毒剂量酒精至生后8、14天SD大鼠，建立急性酒 精中毒模型；热休克预处理模型的制备参照Blake模型制备。用HE染色及 尼氏特染观察新生大鼠脑细胞基本病理学改变，用脱氧核糖核苷酸末端转移 transferasemediatedd-UTP 酶介导的dUTP断端标记(terminal—deoxynucleotidyl nickend 脑细胞酒精中毒损害的影响。 方法： 动物分组与处理：选择生后8’14天健康，雄性，一级质量标准的s～D 大鼠30只，体重18．4±3．89，随机分为三组：单纯生理盐水组、单纯酒精 组、热休克预处理加酒精组，每组10只。单纯酒精组，称重后，以中毒剂量 酒精2．59／kg腹腔注射无水酒精溶液(99．7％分析纯)；热休克预处理加酒精 饲养24h后，再予酒精处理，余具体步骤同单纯酒精组；单纯生理盐水组予 g／kg) 生理盐水腹腔注射处理。三组经处理后6小时，用2％戊巴比妥(40m B H=7．4) 经腹腔麻醉后经左心室快速灌注4％多聚甲醛溶液(用PS配制，P 后，取脑组织并修块，参照《大鼠脑立体定位图谱》取冠状位脑块(视交叉 后2’6mm含海马区)置于4％多聚甲醛溶液中固定24小时，梯度酒精脱水，石 3 塑婆奎兰堡!堂堡堡苎 ——一一 蜡包埋，冠状位取5um切片，用HE染色和尼氏染色观察脑基本病理学改变， 表达。 for 统计分析：所有数据以mean_+SD表