胰高糖素样肽-1长期作用对RIN-m细胞胰岛素合成和分泌功能的影响.pdfVIP

中山大学硕士研究生论文 中文摘要 I 胰高糖素样肽一1长期作用对RN-m细胞 胰岛素合成和分泌功能的影响 学位申请人：王川 导 师：严励教授 中山大学附属第二医院内分泌科 摘 要 一、研究背景 糖尿病是一种常见病、多发病，其患病人数正随着人民生活水平的提高、人 口老龄化、生活方式的改变迅速增加，预计到2025年，全球约有3亿糖尿病患者。 糖尿病已成为发达国家继心血管病和肿瘤之后的第三大非传染性疾病，是严重威 胁人类健康的世界性公共卫生问题。 理论上，胰岛细胞移植重建了内源性的胰岛素分泌系统，有望治愈糖尿病。 胰岛细胞移植没有大规模的应用到临床，其中一个重要的原因是可供移植的胰岛 细胞匮乏，供体数量远远少于需要胰岛细胞移植的患者数。 获得足够的胰岛细胞是移植成功的关键之一，而体外扩增的方法为获得足够 的胰岛细胞提供了一种可能。研究表明体外扩增胰岛细胞，经过15个细胞增殖周 期，细胞数量可以增加30，000倍。故单就数量而言，体外扩增的方法完全可以达 到胰岛细胞移植的要求。但在体外扩增的过程中，随着培养时间的延长，细胞合 成和分泌胰岛素的能力都会逐渐下降。同时，某些与胰岛素合成和分泌有关的基 (GK)等，从而推测胰岛细胞功能下降与这些基因表达下降有关。 如果将这种功能下降的胰岛细胞植入体内，其降血糖的作用是有限的，如何 维持体外扩增的胰岛细胞的功能，成为近年来糖尿病研究领域的热点之一。 11 中山大学硕士研究生论文 中文摘要 转录调控因子，故调节PDX—l基因的表达是维持胰岛细胞功能的可能途径之一。 胰高糖素样肽一1(GLP一1)是一种生理性肽类肠道激素，主要由回肠末端、结肠 和直肠中的神经内分泌细胞L细胞分泌。GLP—l主要作用于胰岛B细胞，在葡萄糖 的协同作用下与B细胞膜上特异性受体结合后，具有刺激胰岛素分泌，提高B细 胞对葡萄糖的敏感性，刺激B细胞中胰岛素基因的转录和翻译等作用。有研究表 mRNA的表达，从而促使其合成和分 明，GLP一1短期内可明显促进胰岛细胞PDX—l 泌更多的胰岛素。但GLP—l的长期作用尚不明确。 胰岛细胞的体外扩增需要较长的时间，该过程中伴随着胰岛细胞功能的下降。 我们试图用GLP一1长期作用于体外扩增的胰岛细胞，观察其对胰岛细胞功能的影 响及探讨其作用机制，为下一步开展胰岛细胞的移植提供实验依据。 二、研究目的 1、观察GLP．1对体外长期培养的R1N—m细胞胰岛素合成及分泌功能的影响。 2、探讨GLP．1的作用是否与调节PDX．1的水平有关。 三、实验对象和方法 1、细胞株 R1N—m细胞(ATCC) 2、细胞培养 R[N—m细胞在RPMIl640培养液中按常规进行培养，每次传代前用血细胞记数板 行人工细胞计数，以约5×10i个／ml接种，按1：4的比例传代，RIN—m细胞体外培 养7周。 (2)正糖+ 实验分为4个组(1)正糖组：培养液中含5．6mmol／L的葡萄糖； (3)高糖组： GLP一1组：培养液中含5．6mmol／L的葡萄糖和20nmol／L的GLP一1； 的葡萄糖和20nmol／L的GLP一1。每组各5个样本。 ⅡI 中山人学硕士研究生论文 中文摘要 3、研究方法 (1)光镜下观察RIN—m细胞在培养过程中的形态