褐飞虱对吡虫啉的抗性生化机制研究及高效复配剂的筛选毕业论文.docVIP

目 录 摘 要 I ABSTRACT III 第一章 文献综述 1 1 吡虫啉抗性研究进展 1 1.1 吡虫啉简介 1 1.2 吡虫啉抗性产生现状 2 1.3 吡虫啉抗性机理研究概况 3 2 复配杀虫剂 5 2.1 复配杀虫剂简介 6 2.2 复配杀虫剂的评价方法（研究方法） 6 2.3 国内吡虫啉复配杀虫剂的研究情况 8 3 本文复配所用杀虫剂简介 10 3.1 吡蚜酮简介 10 3.2 呋虫胺简介 12 4 研究目的与意义 13 4.1 褐飞虱对吡虫啉的抗性生化机制 13 4.2 褐飞虱对吡蚜酮的生测体系的建立 14 4.3 吡虫啉增效复配剂的筛选 14 4.4 吡虫啉替代药剂呋虫胺的增效复配 15 第二章 褐飞虱Nilaparvata lugens (St?l)对吡虫啉的抗性生化机制研究 17 1 材料和方法 17 1.1 供试虫源及主要试剂 17 1.2 毒力的生物测定 18 1.3 mRNA水平的检测 18 1.4 CYP6AY1基因在大肠杆菌（E. coli）上的表达和膜蛋白的提取 20 1.5 酶活的测定 20 1.6 RNA干扰 21 2 结果 21 2.1 生物测定和增效作用的评价 21 2.2 细胞色素P450单加氧酶系mRNA水平的检测 22 2.3 CYP6AY1基因的功能性表达以及吡虫啉的代谢 23 2.4 CYP6AY1的RNA干扰 24 2.5 田间种群褐飞虱的抗性水平以及CYP6AY1基因的mRNA表达水平的测定 25 3 讨论 26 第三章 飞虱对吡蚜酮的生测体系的建立 29 1 材料和装置 29 1.1 试验用虫 29 1.2 试验药剂 29 1.3 试验装置 30 2. 生物测定方法及流程 31 2.1 生测若虫的准备 31 2.2 吡蚜酮母液的配制 31 2.3 吡蚜酮浸苗处理药剂的配制 31 2.4 浸药处理 32 2.5 生测小苗的接虫前处理 32 2.6 接虫 33 2.7 结果检查与数据处理 33 3. 试验条件参数分析 35 3.1 有机溶剂的选择及对生物测定的影响 35 3.2 药剂处理时间的选择 36 3.3 表面活性剂Triton X-100的选择及对生物测定的影响 38 3.4 浸药时间对生物测定的影响 39 3.5 对照死亡率及试验准确度分析 39 4 讨论 40 第四章 吡虫啉-吡蚜酮高效复配剂的筛选及田间药效试验 43 1 材料与方法 43 1.1 试验材料 43 1.2 药剂的配制方法 44 1.3 药剂毒力的生物测定 44 1.4 增效复配配比的筛选方法 45 1.5 大田药效试验方法 45 1.6 数据分析 46 2 结果与分析 46 2.1 吡虫啉-吡蚜酮增效复配比例的筛选 47 2.2 吡虫啉-吡蚜酮增效复配大田药效试验 50 3 讨论 54 第五章 呋虫胺-吡蚜酮复配剂的筛选 57 1 材料与方法 57 1.1 试验材料 57 1.2 药剂的配制方法 58 1.3 药剂毒力的生物测定 58 1.4 增效复配配比的筛选方法 58 1.5 数据分析 58 2 结果与分析 58 2.1 毒力回归曲线的测定 58 2.2 Mansour法初步评价联合毒力 59 2.3 孙云沛法评价呋虫胺-吡蚜酮不同配比的联合毒力 60 3 讨论 63 全文总结 65 参考文献 67 附录：发表的学术论文 75 致 谢 77 褐飞虱对吡虫啉的抗性生化机制研究及高效复配剂的筛选 摘 要 吡虫啉（Imidacloprid）是近20年来发展最快、使用最多的新烟碱类杀虫剂，其作用机制为有选择性地作用于昆虫神经系统中的乙酰胆碱受体，破坏昆虫中枢神经的正常传导，扰乱昆虫的正常神经活动使其处于极度兴奋状态，逐渐麻痹直至死亡。自从吡虫啉作为新烟碱类第一种杀虫剂在1991年被投入市场，由于其很好的效果和持效性，很快就成为了防治褐飞虱Nilaparvata lugens (St?l)最主要的杀虫剂之一。但是，亚洲多个国家的田间褐飞虱种群调查显示，自2006年以来，褐飞虱对吡虫啉的田间抗性，不论在抗性强度还是在地理分布上都产生了相当大的增加。2009年以来，我国农业部门建议暂停使用吡虫啉单剂防治褐飞虱。但是鉴于吡虫啉较低的防治成本和对与褐飞虱混合发生的白背飞虱和灰飞虱具有较好的防效，吡虫啉还不可避免地与褐飞虱的防治联系在一起，部分地区仍然是重要的药剂品种。 国内外很多学者在褐飞虱对吡虫啉抗性机制方面进行了深入研究。靶标不敏感性方面，本课题组在室内筛选的抗吡虫啉褐飞虱品系中，在吡虫啉作用靶标烟碱型乙酰胆碱受体（Nicotinic Acetylcholine Receptors）两个α亚基中发现了Y151S点突变，与褐飞虱对吡虫啉的抗性密切相关。代谢抗性方面，无论是室内抗性品系还是田间种群，都