利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌U32染色体的基因置换中断系统.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’() * ! +( *# 年 月 $%%$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 ,-). $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌!# 染色体的 基因置换$ 中断系统 丁晓明 张 霓 田永强 姜卫红 赵国屏 焦瑞身 （中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所，上海 $%%%0$ ） 摘 要 地中海拟无枝菌酸菌 是力复霉素 的工业产生菌，其遗传操作一直是一个难题。在该菌株 高 H0$ I’ J+K 效电转化的基础上，利用同源重组的原理，建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换L 中断系统。通过大肠杆 菌重组质粒 构建、转化及两步重组筛选，成功地用 淀粉酶基因（ ）取代了地中海拟无枝菌酸菌 染 CJM!!% / +32 H0$ ! 色体上的 氨基 羟基苯甲酸合成酶基因（ ）。第一步单交换和第二步双交换的频率分别是 和 0/ /2/ +4+ % N2 O P % N O $ O 。将质粒CJM!!% 变性后转化可显著提高重组频率，在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提 高其双交换重组的频率。此外，通过转化构建的两端带同源区段的线性J+K 片段及一步重组筛选，我们在地中海 拟无枝菌酸菌 染色体的 ， 基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因（ ），其效率约为 转化子 H0$ +3*5 *#- 6 +7 * 0% P 2% L ?J+K。 关键词 地中海拟无枝菌酸菌，同源重组，基因置换L 中断 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） Q# K !%%%/0%5! $%%$ %#/%#0!/% 力复霉素（ ）是一种安莎类（ 节基因或限速酶进行功能分析，构建工业高产菌。 R;S7:.D; KB7:./ D;B）抗生素，由革兰氏阳性菌地中海拟无枝菌酸菌 上述研究的开展，需要用到染色体基因阻断L置 （ ）产生，可治疗由分枝杆菌 换技术。在抗生素产生链霉菌的遗传工程中，这被 8320(,+/(7# 3%9#/%**+$%# （ ）和肺炎球菌（ ）引起的各 证明是一种非常有效的方法。然而，由于力复霉素 T.D(G7DU4A;-: V4-:(D(DD-B ［］ 种病症! ，具有良好的疗效，并且在抑制肿瘤方面亦 产生菌8320(,+/(