11 生物和技术原理.ppt

转座子标签法 转座子标签法是将一株携带有功能性转座系统的微生物与某一污染物降解菌混合，因转座因子插入到某一降解基因的序列中而破坏了该基因编码的蛋白（酶），导致该菌的降解性能的改变或丧失，进而筛选出转座子插入突变株的方法。 降解菌 转座子(Tn5)突变 降解突变株的选择 从突变株中获得转座子(Tn5)及附近序列 从降解菌中筛选降解基因 在工程菌中表达 转座子标签法 分辨培养大肠杆菌S17-1（含Tn5 转座子）与降解菌 按一定比例混合 过滤，并将滤膜置于LB培养基培养6h 用磷酸缓冲液将膜上的菌冲洗掉，稀释后涂布于选择培养基（含Amp及待降解物）中培养 长出菌落即为Tn5插入变异株 筛选抗药性基因，测定上、下游序列 转座子的遗传学效应 (1) 引起插入突变。 (2) 插入位置上出现新的基因。 (3) 转座子是以它的一个复制品转移到另一位置，而在原来位置上保留原有的转座子。 (4) 改变染色体结构，主要导致染色体缺失、倒位等染色体畸变。 (5) 转座子可以从原来位置上消失，这一过程称为切离。准确的切离使因插入转座子而失活的基因发生回复突变，不准确的切离则不发生回复突变，而是带来染色体畸变。 (6) 调节基因活动的开关。 (7) 产生新的变异，有利于进化。 4. 基因文库的构建 基因文库：生物染色体基因组各DNA片段的克隆总体。 文库中的每一个克隆只含基