DNA的生和物合成.ppt

领头链的合成： 领头链的子链沿着5?→3?方向可以连续地延长。 后随链的合成 在复制叉同时合成前导链和后随链 复制过程简图 原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。 ori ter E.coli 82 32 ori ter SV40 50 0 三、复制的终止 5? 5? 5? RNA酶 OH P 5? DNA-pol Ⅰ dNTP 5? 5? P ATP ADP+Pi 5? 5? DNA连接酶 子链中的RNA引物被取代 真核生物DNA生物合成过程 The Process of DNA Biosynthesis in eukaryotes 第 四 节 真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等； DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶?/?转换； 切除冈崎片段RNA引物的是核酸酶RNAse HⅠ和FEN1等。 真核生物与原核生物DNA复制的差异： 哺乳动物的细胞周期 DNA合成期 G1 G2 S M 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）和pol δ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 一、真核生物复制的起始与原核基本相似 酵母复制起点为自主复制序列（autonomously replicating sequences，ARS）： 酵母染色体含有多个复制起点。 元件A(富含A/T的共有序列)：结合一个特异的蛋白质复合物──复制起点识别复合物(ORC)。 3个序列(B1、B2和B3)可以增加复制起点的效率，其中B2的9个碱基与上述ARS共有序列相同。 酵母复制起始点 增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在复制起始和延长中起关键作用。PCNA为同源三聚体，具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象，即形成闭合环形的可滑动DNA夹子，在RFC的作用下PCNA结合于引物－模板链；并且PCNA使polδ获得持续合成能力。PCNA水平也是检验细胞增殖的重要指标。 拓扑异构酶，去除负超螺旋（使解旋酶容易解旋），去除复制叉前方产生的正超螺旋 TolⅠ和TolⅡ DNA双螺旋解链，参与组装引发体 DNA解旋酶 连接冈崎片段 DNA连接酶Ⅰ 核酸酶，切除RNA引物 RNAse HⅠ 核酸酶，切除RNA引物 FEN1 DNA复制，核苷酸切除修复，碱基切除修复 Pol ?/? 合成RNA-DNA引物 Pol ?/引发酶 有依赖DNA的ATPase活性，结合于引物-模板链，激活DNA聚合酶， 促使PCNA结合于引物-模板链 RFC 激活DNA聚合酶和RFC的ATPase活性 PCNA 单链DNA结合蛋白，激活DNA聚合酶，使解旋酶容易结合DNA RPA 功 能 蛋白质 真核DNA复制叉主要蛋白质的功能 （二）常见的真核细胞DNA聚合酶有5种 DNA-pol ? 起始引发，有引物酶活性。 延长子链的主要酶，有解螺旋酶活性。 参与低保真度的复制 。 在复制过程中起校读、修复和填补缺口的作用。 在线粒体DNA复制中起催化作用。 DNA-pol ? DNA-pol ? DNA-pol ? DNA-pol ? 真核生物和原核生物DNA聚合酶的比较 E.Coli 真核细胞 功能 Ⅰ 填补复制中的DNA空隙，DNA修复和重组 Ⅱ 复制中的校对，DNA修复 ? DNA修复 ? 线粒体DNA合成 Ⅲ ? 前导链合成 DnaG ? 引物酶 ? 后随链合成 真核生物的DNA聚合酶 二、DNA聚合酶的碱基选择和校对功能实现复制的保真性 复制按照碱基配对规律进行，是遗传信息能准确传代的基本原理。 此外还需酶学的机制来保证复制的保真性。 遵守严格的碱基配对规律； 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 复制出错时有即时校对功能。 DNA复制的保真性至少要依赖三种机制： （一）复制的保真性依赖正确的碱基选择 利用“错配”实验发现，DNA pol Ⅲ对核苷酸的参入（incorporation）具有选择功能。 DNA pol Ⅲ对嘌呤的不同构型表现不同亲和力，因此实现其选择功能。 （二）聚合酶中的核酸外切酶活性在复制中辨认切除错配碱基并加以校正 核酸外切酶(exonuclease)是指能从核酸链的末端把核苷酸依次水解出来的酶，外切酶是有方向性的。 A：DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基