hplc测逗通果脯中苯甲酸.pptVIP

概述 苯甲酸又名安息香酸，微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏。化学性质较稳定。苯甲酸钠易溶于水，难溶于有机溶剂，在酸性条件下（pH2．5~4）能转化为苯甲酸。在酸性条件下苯甲酸及苯甲酸钠防腐效果较好，适宜用于偏酸的食品（pH 4．5~5）。苯甲酸的毒性较小，1996年FAO/WHO限定苯甲酸及盐的ADI值以苯甲酸计为0~5mg/kg体重。 果脯中苯甲酸含量的测定 ——高效液相色谱法 一、实验目的 1.学习高效液相色谱仪的操作 2.了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理 3.掌握高效液相色谱法进行定性定量分析的基本方法 实验原理 将浓度不同的苯甲酸标准溶液与未知样品在相同色谱条件下进行分离试验，分别测得它们在色谱图上的保留时间tR和峰面积A，可直接用tR进行定性分析，并以峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（外标法）测定食品中的苯甲酸。 仪器试剂 Agilent1100高效液相色谱仪（带紫外检测器）；色谱柱(Kromasil C18,5 um*150mm*4.6mm),平头微量注射器； 分析天平(精度0.1mg)、料理机。 甲醇(SG)、乙酸铵 (AR)、苯甲酸标准品(≥99%,国家标准物质中心) 实验用水为超纯水 甲醇：经滤膜0.45um过滤； 乙酸铵溶液(0.02mol/l):准确称取1.54g乙酸铵，加入1000mlH2O溶解，并经0.45um滤膜过滤； NaHCO3溶液(20g/L):称取2g NaHCO3,加水100ml,摇匀； 苯甲酸标准储备液（1mg/ml）：准确称取100mg苯甲酸，加NaHCO3溶液（20g/L）5ml,加热溶解，移入100ml容量瓶并定容； 流动相：甲醇:乙酸铵溶液(0.02mol/l)=5:95,流动相进入色谱前，用超声波发生装置脱气10min； 待测试样：果脯样品。 实验内容 （1）苯甲酸标准使用液（100ug/ml）的配置：取储备液10ml,放入100ml容量瓶，加水稀释至刻度摇匀，并经0.45um滤膜过滤。 （2）标准溶液： 分别精密量取 5、 10 、20、40 mL 的标准使用液至 50mL 容量瓶中 ，用超纯水定容，得 10 、20 40 、80 、100 ug/mL 的系列标准溶液 . （3）样品处理：准确称取0.05g果脯置于100ml洁净干燥的烧杯中，用20ml蒸馏水煮沸10min，冷却后，将上层清液经0.45um滤膜过滤于50ml容量瓶，残渣按此步骤再重复一次，将清液全部转移至容量瓶，并定容至刻度。 （4）色谱仪器条件：泵的流速1.0ml/min;检测波长230nm,进样量20ul，柱温室温。 （5）待仪器基线稳定后，由低浓度至高浓度进苯甲酸标准液，记录不同浓度下保留时间及峰高、峰面积；再测定果脯试液的色谱图，分别记录三个样品的保留时间及峰高、峰面积。 数据处理 （1）以标样的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。 （2）根据保留时间确定样品的中的苯甲酸的色谱峰。 （3）根据求取样品中苯甲酸的浓度。