Biosynthesis of S-adenosylmethionine by Saccharomyces cerevisiae酿酒酵母生物合成腺苷甲硫氨酸的研究.pdfVIP

摘要 S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine，简称SAM，SAMe 或者AdoMet)，又 名S-腺苷蛋氨酸，是一种广泛存在于植物、动物、微生物活细胞体内的重要代谢物质， 同时也是人体内一种作用仅次于ATP 的重要生理活性物质。SAM 在细胞内主要起着转 甲基、转硫和转氨丙基的作用，在临床上，对于治疗肝病、抑郁症、关节炎、肌纤维 痛和阿尔茨海默等都具有一定的疗效，目前广泛的应用于医药行业和保健品行业。SAM 的制备方法主要有化学合成法、酶促合成法、发酵法三种，其中通过对酵母属的微生 物培养过程中向培养基中添加一定量的甲硫氨酸，提高细胞内SAM 的积累量再从中分 离、提纯SAM 是目前工业生产的主要途径。为了实现国内SAM 的工业化生产，采用新 的基因工程策略构建高效、稳定的产SAM 菌株具有重要意义。 酿酒酵母是常见的真核生物，现已被美国食品与药品安全管理局认证为安全的微 生物。现有研究表明，SAM 在酿酒酵母中的积累程度要高于其他的微生物，研究重点 主要为高产菌株的筛选、发酵条件的优化等，但在国内一直未能实现工业化生产。 本论文对酿酒酵母生物合成腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine，SAM）发酵过 程进行工艺优化。首先测定了此酿酒酵母（S. cerevisiae CGMCC 2842 ）的生长曲线， 研究了半胱氨酸添加量 （0、2、4、6、8 mmol/L）、半胱氨酸添加时间 （0、12、16、 20、24 h）、碳源 （葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、糖蜜）对菌体浓度和 SAM 产量的影响。 结果表明，在 10 L 发酵罐中，发酵 16 h 时，补加半胱氨酸至浓度2 mmol/L，发酵 36 h 时菌体（DCW）合SAM 浓度分别达到15.40 g/L 和4.11 g/L；在此基础上，更换 糖蜜为碳源，并在还原糖浓度低于5 g/L 时，流加糖蜜，相当于还原糖的流加速率为 0.8 g/L/h，发酵36 h 时菌体浓度和SAM 产量分别为15.50 g/L 和5.02 g/L；经过发 酵工艺优化，发酵液中SAM 浓度提高了43.8%。 关键词：腺苷甲硫氨酸，酿酒酵母，半胱氨酸，碳源，糖蜜，补料工艺 I Abstract S-adenosylmethionine (S-adenosyl-L-methionine, also known as SAM, SAMe or AdoMet) is an important intermediate in all living organisms and exhibits pivotal roles in various biological reactions, which has been estimated that only ATP participates in more reactions than SAM. In addition to serving as a major biological methyl donor, SAM is also a precursor to produce aliphatid polyamine, or glutathione (GSH) via trans-sulfuration. It has been successfully used in human therapy for liver disorders, depression, osteoarthritis, fibromyalgia and Alzheimer ’s diseases etc. SAM production by yeast fermentation, which compared with by chemical coupling or by enzymatic synthesize, is efficient and practical approach through the extraction of yeast cells cultured in media supplemented with L-methionine (L-Met). Const