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定点突变技术 基因突变包括单个碱基或片断的替换，基因片断的插入与删除等 根据其特点可将基因突变技术分为两大类： 位点特异性突变 定点突变 随机突变 定点突变的研究意义 1 对调控区进行突变 研究基因结构与功能之间的关系 2 对编码基因进行突变 检验特定残基在蛋白质结构、催化活性和配基结合能力中的作用。 获得突变蛋白。 位点特异性突变的类型 寡核苷酸介导的基因突变指用含有突变碱基的寡聚核苷酸片断作为引物，在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。 盒式突变是利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中的相应序列。 PCR介导的基因突变 Kunkel 法小结 用此种方法产生的突变体不必利用核苷酸探针标记来筛选阳性噬菌斑，可直接通过序列分析来确定突变体，这样就免除了繁杂的杂交程序。 此法的成功关键，是要得到好的含Ｕ单链模板DNA。 （可用含有目标基因的M13双链DNA 载体感染E. coli CJ236品系，其为dut- ung- 菌株） Oligo诱导突变的改进方法 武汉大学的叶林柏等人对Oligo诱导突变方法进行了改进。2-3个核苷酸替换的突变频率可达80%-85%，即使是需要有道连续4个氨基酸缺失，突变频率也高达40%－５０％。 PCR介导的基因突变 在基因5’和3’末端产