MTT法小结与.pptVIP

药物的配制 浓度 体积 过滤 细胞数目 6000×100=6×105 细胞体积 200ul ×100=20 ml 细胞密度 0.3 ×105 药物浓度 200 100 50 25 药物体积 15 ×100ul=1.5 ml 半倍稀释 MTT法检测细胞活力 细胞毒性检测 细胞形态学观察 细胞生长状态观察 细胞活性检测 MTT法目的和意义 检测细胞存活和生长情况 用于评价药物产生的细胞毒作用 原理 四唑盐（噻唑蓝）是一种能接受氢原子的染料，简称MTT 活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的紫蓝色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量，从而反映细胞的增殖情况。 在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与活细胞数成正比。 活细胞+MTT 琥珀酸脱氢酶 紫蓝色结晶物 Formazan 贴壁细胞操作步骤 1.??接种细胞：用0.08%胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔5000-6000个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积50 ul。 （边缘孔用空白培养基填充）。 2.??培养细胞：将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5% CO2及饱和湿度条件下培养，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），