SDS聚丙烯跤耄胺凝胶技术.pptVIP

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-Polyacarylamide Gel Electrophoresis 原理 SDS使蛋白质穿上带负电的外衣 PAG是固相载体 Pr.向阳极泳动的速度和分子大小有关 Pr.在凝胶上的位置是鉴别它的依据 操作卡片1——聚胶 分离胶的聚合（12%） 操作卡片2——聚胶 成层胶的聚合（5%） 操作卡片3——电泳 血清以生理盐水稀释至含蛋白8.0g/L。 样本10ul与样本缓冲液（用前A液95ul加B液5ul）10ul混合（相当于40ug蛋白）后，煮沸（100°C)3分钟，取5ul加入样本槽内。 成层胶电压100V，分离胶电压200V。 操作卡片4----染色 12.5%三氯乙酸浸泡固定 0.1%CBB(考马氏亮蓝)染色30分--1小时 7%醋酸溶液浸泡脱色 * * 蒸馏水 5.0ml 30%丙烯酰胺 6.0ml pH8.6缓冲液 3.7ml 10%SDS 150ul 10%过硫酸铵 150ul 抽气3-5分钟 TEMED