临床病原学与检查.ppt

临床病原学检查 不同病原体(细菌、螺旋体、支原体、放线菌、衣原体、立克次体、病毒、真菌、原虫、蠕虫)所致感染性疾病的实验诊断方法各有其特点，但几乎都遵循以下基本原则：①正确、规范采集和运送标本；②通过直接显微镜查见病原体或检出病原体抗原成分；③借助分子生物学的方法检测病原体核酸；④利用免疫学方法检测机体对病原体抗原成分产生的免疫产物；⑤对病原体进行分离与鉴定。在完成病原体的检出和鉴定任务后，结合病人的病史、症状或体征，快速作出诊断。并积极参与临床选择抗微生物药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免耐药菌株的产生。 标本采集和运送 ： 根据各种病原体所致感染性疾病的病程确定标本采集的时间、部位和种类。所有采集的标本均置于无菌或清洁容器中，不能接触消毒剂和抗菌药物。　标本必须注明姓名、年龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目等。标本采集后应按要求处理，立即送往病原学实验室，对于烈性传染病材料的运送需专人护送。 (一)血液标本 　疑为菌血症、败血症和脓毒血症患者，一般在发热初期和高峰期采集，如已用抗菌药物治疗者，则在下次用药前采集。采样以无菌法由肘静脉穿刺，成人每次10-20ml，婴儿和儿童为1-2ml，血液置于盛有抗凝剂聚茴香脑磺酸钠无菌瓶中送检。大多数菌血症呈周期性，故血标本也需在24h内周期性收集，一般24h内收集2-3次血标本分别培养。 (二)脑脊液与其他无菌体液标本 　无菌采集脑脊液，脑脊液通常离心10000×g lOmin，取沉淀作显微镜检查。引起脑膜炎的病原体脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等其抵抗力弱，不耐冷、容易死亡，故采集的脑脊液应立即保温送检或床边接种。胸水、腹水和心包液等因标本含菌量少宜采集较大量标本送检以保证检出Tc (三)尿液标本 　外尿道寄居有正常菌群，故采集尿液时更应注意无菌操作，常用清洁中段尿作为送检标本。对于厌氧菌的培养，采用膀胱穿刺法收集、无菌厌氧小瓶运送。排尿困难者可导尿，但应避免多次导尿所致尿路感染。 (四)呼吸道标本 　鼻咽拭子、痰、通过气管收集的标本均可作为呼吸道标本。后者可避免正常菌群污染，为下呼吸道感染病原学诊断的理想标本。鼻咽拭子和鼻咽洗液可供鼻病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎衣原体、溶血性链球菌等病原学诊断。不合格的痰 标本(扁平上皮细胞≥25个／低倍镜视野)富含上呼吸道正常菌群，在病原学诊断时需 加以注意。 (五)粪便标本 　取含脓、血或粘液粪便置于清洁容器中送检排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子采集。根据细菌种类不同选用合适运送培养液以提高阳性检出率，如副溶血弧菌引起腹泻的粪便应置于碱性蛋白胨水或卡一布运送培养液。一次粪便培养阴性不能完全排除胃肠道病原菌的存在，对于传染性腹泻患者需三次送检粪便进行细菌培养。对疑为寄生虫感染者，应尽快运送水样便，以保持原虫滋养体活力；若不及时送检，粪便标本置于含10％甲醛和聚乙烯醇的小螺口塑料容器内保存。 (六)泌尿生殖道标本 　根据不同疾病的特征及检验目的采集不同标本，如性传播性疾病常取尿道口分泌物、外阴糜烂面病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物和前列腺液等。对生殖道疱疹常穿刺疱疹液，盆腔脓肿者则于直肠子宫陷凹处穿刺脓液。怀疑衣原体感染的标本不应使用木柄拭子，因为木质对该病原体有毒性作用。除淋病奈瑟菌保温 送检外，所有标本收集后40℃保存直至培养。 (七)创伤、组织和脓肿标本 　对损伤范围较大的创伤,应从不同部位采集多份标 本。采集部位应首先清除污物,以碘酒,酒精消毒皮肤,防止表面污染菌混入标本影响 检测结果。开放性脓肿的采集,用无菌棉拭采取脓液及病灶深部分泌物。封闭性脓肿,则以无菌干燥注射器穿刺抽取;疑为厌氧菌感染者,取脓液后立即排净注射器内空气， 针头插入无菌橡皮塞送检,否则标本接触空气导致厌氧菌死亡而降低临床分离率。用于病毒检测的组织标本宜放在有灭菌盐水纱布的培养皿内或病毒运送培养基内运送,用匀浆管匀浆、离心、过滤后,作病毒分离鉴定。 (八)血清标本 　用于检测患者特异性抗体效价以辅助诊断感染性疾病。采集血液 置无菌试管中， 自然凝固、血块收缩后吸取血清，56 ℃加热30min以灭活补体成分。灭活血清保存于－20℃。 检测方法 　由实验技术直接或间接获得病原体及病原体结构成分，是确诊感染性疾病的一个重要依据。临床实验室中细菌性疾病以培养分离技术为主，病毒性疾病以免疫学方法为主。 (一)直接显微镜检查 标本直接涂片、干燥、固定后染色，或经离心浓缩集菌，涂片染色，置光学显微镜下观察病原体的形态、染色性或观察宿主细胞内包涵体的特征。另一种方法是采用悬滴法或压滴法，在不染色状态下借助暗视野显微镜或相差显微镜观察病原体的生长、运动方式、螺旋体形态和运动。湿式涂片有助于寄生虫虫卵