建兰花叶病毒TGB1基因的原核表达及多克隆抗体制备.pdfVIP

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2017-10-15 发布于山东
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建兰花叶病毒TGB1基因的原核表达及多克隆抗体制备.pdf

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建兰花叶病毒TGB1基因的原核表达及多克隆抗体制备

146 广东农业科学 2014年第 19期建兰花叶病毒TGB1基因的原核表达及多克隆抗体制备李明健，洪鲲112，牛晓娟，乙引一．万睛姣l12 (1．贵州师范大学生命科学学院，贵州贵阳 550001； 2．贵州省植物生理与发育调控重点实验室，贵州贵阳 550001) 摘要：以GenBank中的CyMV—TGB1fGenBank登录号：HQ681906．11基因全序列设计 1对特异性引物．采用 RT—PCR从感染建兰花叶病毒的白花刺果曼陀罗叶片总RNA扩增出该病毒的TGB1基因。测序结果表明，该 TGB1 基因全长702bp，编码233个氨基酸残基。构建了原核表达载体 pET32a(+)一TGB1，将重组质粒转化大肠杆菌 BL2l (DE3)，在25℃以 1．0mmol／LIPTG诱导表达重组蛋白基因。SDS—PAGE分析表明，重组蛋白分子量约为44ku，与预测相符。以该重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔，制备的抗体效价达 l：25600 关键词：建兰花叶病毒；TGB1；原核表达：多克隆抗体中图分类号：$432．41；Q786 文献标识码：A 文章编号：1004—874x(2014)19一O146—04 ProkaryoticexpressionofTGB1geneofCymbidium mosaicvirusandpreparationofpolyclonalantibodies againsttherecombinantTGB1 LIMin-jian，HONGKun。。，NIUXiao-juan，YIYin，WANQing-jiao’ (1．Schoolof Sciences，GuizhouNormalUniversity,Guiyang550001，China； 2．GuizhouKeyLaboratoryofPlantPhysiologyandDevelopmentalRegulation，Guiycmg550001，China) Abastract：Basedonthe B1sequenceofCymbdiummosaicvirus fCyMV GenBankAccessionNo：HQ681906．1)， apairofspecificprimerswasdesigned foramplifyingthe 日1genefrom the totalRNA ofDaturastramonium leaves infected with CyMV．DNA sequencing showed thatthe B1gene lengthwas702 bp and encoded 233amino acid residues．The他日1genewassubcloned intoaprokaryotieexpression vectorpET32a f+1．By inducingwith 1．0mmol／L IPrrG at25 ．therecombinantTGB1genewasexpressedinE colBL21fDE31anditsproductwasidentifiedasaspecific bandof44 ku bv SDS—PAGE．PolyclonalantibodiesagainstrecombinantTGB1proteinwereobtained byhypodermal iniectionofrabbits．Thetitreofantiserumwas1：25600． Keywords：Cymbidium mosaicvirus；TGB1；prokaryoticexpression；polyclonalantibodies