结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定.pdfVIP

中 国 病 原 生 物 学 杂 志 2014年 9月 第 9卷第 9期 JournalofPathogenBiology September2014，Vo1．9，No．9 ·769 · DOI：10．13350／j．cjpb．140901 ·论著 结核分枝杆菌 Pup、Dop、PafA、Mpa基 因重组 穿梭表达质粒的构建及鉴定* 张玉清 ，雷英 ，吴芳 ，章乐 ，吴江东 ，曹旭东 ，朱彬 ，何丽 ，邬博 ，李瑞 山 ，王钊 ，张万江H (1．石河子大学医学院病理生理学教研室，石河子大学 “新疆地方与民族高发病”教育部重点实验室 ， 新疆石河子 832002；2．石河子市人 民医院老年病一科) 【摘要】 目的 构建结核杆菌泛素样蛋 白一蛋 白酶体系统 中Pup、Dop、PafA和 Mpa基 因的重组大肠埃希菌一分枝杆 菌穿梭表达质粒 pMV361／Pup、pMV361／Dop、pMV361／PafA和 pMV361／Mpa，并对其进行鉴定 。 方法 提取结核 杆菌 国际标准强毒株 H37Rv基 因组 DNA，以此为模板 PCR扩增 Pup、Dop、PafA和 Mpa基 因编码序列并测序 。扩增产 物克隆至大肠埃希菌一分枝杆菌穿梭表达质粒 pMV361，并转化 E．coliDH5a感受态细胞 ，利用 PCR技术、双酶切技术 及基因测序技术对构建的重组穿梭表达质粒进行鉴定 。 结果 PCR扩增 的 Pup、Dop、PafA和 Mpa基 因片段分别为 213、1683、1377、和 1848bp，与预期长度一致 ；双酶切鉴定 Pup、Dop、PafA 和 Mpa基 因均成功插入 穿梭表达质粒 pMV361，测序显示插人穿梭表达质粒 pMV361的Pup、Dop、PafA和 Mpa基 因序列与 GenBank公布 的序列一致 。 结 论 成功构建 了重组大肠埃希菌一分枝杆菌穿梭表达质粒 pMV361／Pup、pMV361／Dop、pMV361／PafA和 pMV361／ Mpa，为进一步研究结核分枝杆菌泛素样蛋 白一蛋 白酶体系统奠定了基础 。 【关键词】 结核分枝杆菌；泛素样蛋 白一蛋 白酶体系统 ；pMV361；重组穿梭表达质粒 【中图分类号】 R378．911 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673—5234(2014)09-0769—06 [JournalofPathogenBiology．2014Sep；9(9)：769—774．] Construction and identification ofEscherichia coli-M ycobacterium recombinantshuttleexpression plas— midsforPup，Dop，PafA，andMpaofM ycobacterium tuberculosis ZHANG Yu—qing ，LEIYing。，WU Fang，ZHANG Le，WU Jiang—dong，CAO Xu—dong ，ZHU Bin，HELi，WU Bo，LIRui—shan，WANG Zhao，ZHANGWan—jiang (1．DepartmentofPatho— physiology，MedicalSchoolofShiheziUniversity，XinjiangKeyLaboratoryofEndemicandEthnicDiseases，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang832002，China；2．FirstDepartmentofGeriatrics，ShiheziPeoplesHospita1) [AbstractJ 0bjectives ToidentifythegenesPup，Dop，PafA，andMpaintheprokaryoticubiquitin-likeprotein-protea— somesystem of