琼脂糖凝胶与电泳技术侯云鹏.pptVIP

琼脂糖凝胶电泳 姓名：侯云鹏 学号：2013107014 专业：作物遗传育种 学院：农学院 琼脂糖凝胶电泳原理 琼脂糖凝胶电泳步骤 琼脂糖凝胶电泳注意事项 原理 带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。 与蛋白质分子相似，核酸分子也是两性解离分子 ，pH3.5时，碱基上的氨基酸基团解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离，整个核酸分子带正电荷，在电场中向负极泳动；在pH8.0-8.3时，碱基几乎不解离，磷酸根全部解离，核酸分子带负电荷，向正极移动。 不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。所以采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使得大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离目的，在loading buffer的作用下，可观察电泳的进行情况。 凝胶浓度和DNA分子的有效分离范围 电泳缓冲液 电泳缓冲液是指在进行电泳时所使用的缓冲溶液，用以稳定体系酸碱度。常见的核酸电泳缓冲液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。 作用 ： 　①缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳 时正极与负极都会发生电解反应，正极发生的是氧化反应，负极发生的是还原反应，长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两极的