琼脂糖凝胶与电泳.pptxVIP

琼脂糖凝胶电泳检定质粒DNA; 带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类:自由界面电泳不需支持物，这类电泳目前已很少使用;而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳，其优点主要在于操作简单、快速、灵敏。 琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA、RNA分子混合物的方法，以琼脂糖作为支持介质，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的 ;实验原理;主要实验器材;琼脂糖Agarose（AG）：从石花菜及其他红藻类植物提取出来的一种线状高聚物，由1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链构，是琼脂中不带电荷的中性组成成份，琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶; 溴化乙锭（EB）为扁平状分子，是一种荧光染料。EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出桔红色荧光,荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。同时EB也是强致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。 ;琼脂糖凝胶中DNA的观察;上样缓冲液（Loading Buffer）：0.25％溴