琼脂糖凝胶与电泳检测DNA.pptVIP

实验10 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 一、实验原理 DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA 分子在高于等电点的pH 溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双涟DNA 几乎具有等量 净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下，DNA 分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA 分子本身的大小 和构型。 一、实验原理 具有不同的相对分子质量的DNA 片段泳动速度不一样，可进行分离。DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离不同相对分子质量的DNA ，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA 分子。 二、实验仪器 1． 恒温培养箱 2 ．琼脂糖凝胶电泳系统 3 ．台式离心机 4 ．高压灭菌锅 5 ．紫外线透射仪 6 ．凝胶成像系统 三、实验试剂 １．Loading dye (0.25%溴酚兰+40%蔗糖水溶液) 　　10ml需0.025g溴酚兰和4g蔗糖 ２．ＥB：需1g溴化乙锭 ３．TBE：５×TBE贮液2L：108g Tris-base、 55g硼酸、40ml 0.5M的EDTA(pH8.0) 需7.4g disodium·2H2O ４