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非水相酶反应许建和 介质工程 长期以来,人们一直错误地认为酶只能在水溶液 中使用; 若与有机溶剂接触，就会变性失活。 由于大多数有机化合物在水中很难溶解，有些还 不稳定，因此化学合成大多使用有机溶剂作为反 应介质，从而忽略了对生物催化剂的开发和应用。 20世纪80年代初期兴起的非水相酶催化技术则彻底地突破了酶只能在单一水溶液介质中应用的局限。研究表明，酶可以在含有各种有机溶剂和微量水分的非水介质系统中发挥催化作用，并且所表现出的催化性能(如活力、选择性、稳定性)与在常规水溶液介质中的性能截然不同，从而极大地扩展了生物催化剂的应用范围。 正是通过非水相介质系统的多样性变化，也可以在很大程度上调控酶的催化性能，达到“蛋白质工程”所欲达到的类似效果，因此才提出了“溶剂工程”、“介质工程”或“微环境工程”等概念。因此,“介质工程”被视为蛋白质工程的补充。 当酶的催化性能不理想时, 如何改造？ 非水相生物催化的优点 (1) 能提高非极性（水难溶）底物的溶解度； (2) 使热力学平衡向有利于合成的方向偏移； (3) 改变酶对底物的专一性, 包括位置和立体专一性； (4)能抑制依赖于水的某些不利反应(如酸酐和 卤化物的水解，酚/醌的聚合等)； (5) 由于酶不溶于有机溶剂而无须固定化， 或简单吸附于无孔表面(如玻璃珠)即可； (6) 可通过过滤或离心等简单方法回收酶，反复利用； (7) 从低沸点溶剂中可以较容易地分离产物； (8) 酶的稳定性提高； (9) 消除了微生物的污染； (10) 酶可能被直接应用于化工过程。 典型的非水相生物催化介质系统 水或缓冲溶液系统； 2. 水-有机溶剂单相系统 3. 水-有机溶剂两相系统; 4. 乳状液或微乳液系统 5. 微水有机溶剂单相系统; 6. 超临界流体系统 7. 离子液体介质系统 8. 双水相系统; 9. 浊点系统; 10. 无溶剂反应系统 1. 单一的水或缓冲溶液系统 由于酶的构象与其离子化状态密切相关，因此酶的体外实验研究通常在一定浓度的缓冲溶液体系中进行，这样可保证酶在最佳pH附近发挥最大的活力。 缓冲溶液的种类很多，在酶催化中使用最多的可能是磷酸盐和Tris-HCl，因为大多数酶的最佳pH在中性范围内(pH5~9)，但也有例外的情况。 例如，我们发现假丝酵母脂肪酶在催化酮基布洛芬氯乙酯水解时，最大活力在pH4.0附近。更为有趣的是，酶的对映选择率(E值)在pH4.0以下迅速升高，在pH2.2 时为13.6，比pH7.0时(E=1.2)提高了一个数量级。 如果酶的最适pH在中性范围，且反应过程中不涉及pH的变化，那么也可以不用缓冲溶液，直接在水中进行酶催化。例如，Furstoss等首次报道了在普通水中用环氧水解酶成功地制备了(S)-2-吡啶环氧乙烷。 2. 水-有机溶剂单相系统 增加亲脂性底物溶解度的一个最简单办法是向反应混合物中加入与水互溶的有机溶剂，通常被称为有机助溶剂或共溶剂(Organic cosolvent)。 常用的助溶剂有二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、二噁烷(dioxane)、丙酮和低碳醇(如t-BuOH)等。 由于形成的是均相系统，因此通常不会发生传质阻碍。一般来讲，该系统中与水互溶有机溶剂的量可达总体积的10%~20% (体积分数)，在一些特殊的情况下，甚至可高达90%以上。有些酶(如酯酶和蛋白酶)在水-有机溶剂均相系统中的反应选择性会增加。 如果该系统中有机溶剂的比例高过某一阈值，将夺去酶分子表面的结构水，使酶失活，也有少数稳定性很高的酶，如南极假丝酵母脂肪酶(CALB)，只要在水互溶有机溶剂中有极少量的水，就能保持它们的催化活性。 此外，当酶催化反应在0℃以下进行时，与水互溶的有机溶剂还能降低反应系统的冰点温度，这是低温酶学研究的内容之一。 3. 水-有机溶剂两相系统 水-有机溶剂两相系统是指由水相和非极性有机溶剂相(烃、醚、酯等)组成的非均相反应系统; 两相的体积比可以在很宽的范围内变动。 底物和产物则主要溶于有机相中; 酶溶解于水相中，这样可使酶与有机溶剂在空间上相分离，以保证酶处在有利的水环境中，而不直接与有机溶剂相接触。 在两相系统中，分配系数(热力学参数)和质量传递系数(动力学参数)决定了酶反应的拟一级速率常数kcat (=Vmax/KM)。因此整个反应的速率主要由这两个因素(溶解度、搅拌速度等)所决定，而与酶的催化能力关系