食品安全实与验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验.pptVIP

实验一 鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验 一、目的与要求 1、了解化学毒物致突变性分析的原理及分析要求。 2、掌握回复突变的测试方法。 二、实验原理 鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。 某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变， 故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液。 三、培养基和试剂 1、 0.5mmol/L组氨酸-0.5mmol/L生物素溶液 2、顶层琼脂培养基 3、底层琼脂培养基 4、营养肉汤培养基 5、盐溶液(1.65mol/L KCl+0.4mol/L MgCl2) 6、0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4) 7、S9混合液 8、溶剂的选择 四、操作方法 1、增菌培养 取营养肉汤培养基5ml，加入无菌试管中，将主平板或冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基内，37℃振荡（100次/min）培养10h。该菌株培养物应每毫升不少于1～2×109活菌数。 2、平板掺入法 实验时，将含0.5mmol/L组氨酸-0.5mmol/L生物素溶液的顶层琼脂培养基2.0mL分装于试管中，45℃水浴中保温，然后每管依次加入试验菌株增菌液0.1mL，受试物溶液0.1mL和S9混